论文部分内容阅读
引言目前器官移植面临的主要问题是：(1)尽管移植器官短期存活十分理想但慢性排斥反应的发生率仍然很高；(2)长期免疫抑制剂的使用除给患者带来生活上的不便及经济上的压力之外，还会产生较严重的副作用。自从在动物模型上发现自发免疫耐受现象以来，特异性诱导移植器官或组织的免疫耐受一直是移植学家的研究目标。肝脏移植具有免疫特殊性：(1)大多数实验动物肝脏移植模型均有自发耐受发生；(2)人类肝脏移植物对排斥反应的易感性大大低于其他器官移植物；(3)肝脏移植与其他器官移植同时施行可延长其他移植物的存活时间；(4)大约25％肝移植受者可完全撤用免疫抑制剂。肝脏作为免疫特惠器官的重要原因是存在树突状细胞(DCs)、枯否氏细胞(KCs)、窦内皮细胞(LSECs)等特异性免疫耐受细胞，而肝脏星状细胞(HSCs)作为免疫耐受细胞的地位还未被完全确定。本研究旨在揭示肝脏星状细胞是否为特异性免疫耐受细胞及其诱导肝脏移植免疫耐受的机制。材料与方法1．动物模型：建立大鼠肝移植模型；2．动物分组：本实验分两组，每组5对大鼠；(1)移植耐受组：Lewis大鼠(供体)—DA大鼠(受体)；(2)移植排斥组：DA大鼠(供体)—Lewis大鼠(受体)；(3)两组移植大鼠于移植术后7天取材检测；3．移植大鼠HSCs的提取和鉴定；4．移植大鼠脾脏TLCs的制备；5．激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)及流式细胞仪(FCM)检测肝脏HSCs与TLCs共孵育后TLCs的凋亡；6．FCM检测肝脏HSCs表面FasL的表达；7．FCM检测抗FasL抗体对HSCs促使TLCs凋亡的抑制作用；8．Western blot检测肝脏HSCs与TLCs共培养后酪氨酸磷酸化水平蛋白变化；9．RT-PCR检测肝脏星状细胞FasL mRNA、B7-H1 mRNA和脾脏T淋巴细胞Fas mRNA水平变化；10．ELISA检测肝脏HSCs与脾脏TLCs共孵育后上清细胞因子IL-2、ZNF-α、IL-10、TGF-β的变化；11．移植肝脏病理组织学检查；12．免疫组织化学检测大鼠移植肝脏α-SMA的表达；13．统计学方法：数据采用均数±标准差((?)±s)表示，组间比较采用t检验。以P＜0.05为差异有显著性。结果1．耐受组移植大鼠HSCs使TLCs的凋亡数量明显高于排斥组；2．耐受组移植大鼠HSCs表面FasL表达明显高于排斥组HSCs；3．耐受组移植大鼠HSCs FasL mRNA、脾脏TLCs Fas mRNA表达高于排斥组移植大鼠；4．抗FasL抗体能部分抑制耐受组移植大鼠HSCs促使TLCs的凋亡作用；5．耐受组移植大鼠HSCs B7-H1 mRNA表达量高于排斥组移植大鼠HSCs；6．耐受组Th2型细胞因子IL-10和Th3型细胞因子TGF-β比排斥组表达明显增高；7．酪氨酸磷酸化水平76Kda蛋白在耐受组的表达量高于排斥组；8．耐受组移植大鼠肝脏HSCs的数量多于排斥组。结论肝脏移植耐受组肝星状细胞通过Fas／FasL途径及B7-H1途径介导T淋巴细胞凋亡；耐受组肝星状细胞可促使Th2／Th3型细胞因子分泌增加；耐受组HSCs促使T淋巴细胞凋亡是通过酪氨酸磷酸化信号通路水平76KDa蛋白的变化来实现的，从而证实了肝星状细胞是特异性免疫耐受细胞之一，与肝脏中的DCs、KCs、LSECs等肝非实质细胞一样肝星状细胞参与调节肝脏移植的外周特异性免疫耐受。