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食管癌是常见的一种恶性肿瘤,它最常见的组织学类型是鳞状细胞癌,全世界每年约有30万食管癌死亡病例,中国是世界上食管癌的高发国家,发病率和死亡率均较高。研究表明,食管癌的发生发展是多因素、多阶段、多基因相互作用的复杂过程,并且存在多种信号通路的异常活化。因此,通过研究食管癌发展过程中的信号通路,阐明食管癌的发生机制,依然是食管癌治疗研究的目标。多个研究报道证明:mTOR/P70S6K信号传导通路在多种肿瘤的发生和发展过程中存在过度激活。mTOR通路参与细胞增殖、分化、迁移等调节,被认为是蛋白质合成的主要信号调节通路。mTOR是一种多功能激酶,其活化后可磷酸化P70S6K并促进mRNA翻译,生成细胞周期跨越G1期所必需的各种蛋白。有报道称mTOR在乳腺癌、结肠癌、淋巴瘤等多种肿瘤中高表达,但在食管鳞状细胞癌中的研究报道还不多。本实验通过免疫组化、Western Blot及RT-PCR方法探讨mTOR及p-P70S6K在食管鳞状细胞癌中的表达情况,并分析它们与食管鳞状细胞癌临床病理学参数的关系,进一步观察mTOR/P70S6K信号传导通路在食管鳞状细胞癌发生发展中的作用,提供一种新的思路针对临床治疗食管鳞状细胞癌。目的:探讨mTOR/P70S6K信号传导通路在食管鳞状细胞癌发生发展过程中的作用及相关机制。方法:1采用免疫组织化学SP法检测90例食管鳞状细胞癌中mTOR与p-P70S6K蛋白的表达情况。将所收集的病例依据不同的年龄、性别、浸润深度、分化程度及临床分期进行分组,分析两者与临床病理学特征的相关性,进一步探讨二者与食管鳞状细胞癌生物学行为之间的关系。2收集新鲜癌组织与癌旁组织各30例,依据不同临床分期进行分组,分别提取每对癌与癌旁组织的总蛋白,并用Western Blot方法检测mTOR与p-P70S6K的蛋白表达,进一步分析两者与食管鳞状细胞癌临床分期的关系。3将30对新鲜组织依据不同分化程度进行分组,分别提取每对癌与癌旁组织的总rna,进行rt-pcr,计算mtor与p70s6k的相对表达量,探讨两者与食管鳞状细胞癌分化程度的关系。结果:1免疫组化结果(1)mtor在食管鳞状细胞癌组织和癌旁组织中的表达90例癌组织的阳性率70.00%(63/90),癌旁阳性率15.00%(3/20),在癌组织中的表达高于癌旁组织,组间差异有统计学意义(p<0.05)。(2)mtor与临床病理指标的关系mtor蛋白表达与食管鳞状细胞癌的分化程度、浸润深度及临床分期存在相关性。低分化鳞状细胞癌阳性率48.72%(19/39),高分化鳞状细胞癌阳性率86.27%(44/51),组间差异有统计学意义(p<0.05);侵及黏膜及黏膜下层者阳性率11.11%(1/9),侵及肌层阳性率55.88%(19/34),侵及纤维膜阳性率91.49%(43/47),阳性率呈逐级升高过程,组间差异有统计学意义(p<0.05);临床分期Ⅰ-Ⅱ期阳性率52.78%(19/36),Ⅲ-Ⅳ期阳性率81.48%(44/54),组间差异有统计学意义(p<0.05)。mtor与患者的年龄、性别、淋巴结转移情况及有无脉管瘤栓无相关性,差异无统计学意义(p>0.05)。(3)p-p70s6k在食管鳞状细胞癌组织和癌旁组织中的表达90例癌组织的阳性率71.11%(64/90),癌旁阳性率5.00%(1/20),在癌组织中的表达高于癌旁组织,组间差异有统计学意义(p<0.05)。(4)p-p70s6k与临床病理指标的关系p-p70s6k蛋白表达与食管鳞状细胞癌的分化程度、浸润深度及临床分期存在相关性。低分化鳞状细胞癌阳性率56.41%(22/39),高分化鳞状细胞癌阳性率82.35%(42/51),组间差异有统计学意义(p<0.05);侵及黏膜及黏膜下层者阳性率22.22%(2/9),侵及肌层阳性率70.59%(24/34),侵及纤维膜阳性率80.85%(38/47),组间差异有统计学意义(p<0.05);临床分期Ⅰ-Ⅱ期阳性率50.00%(18/36),Ⅲ-Ⅳ期阳性率85.19%(46/54),组间差异有统计学意义(P<0.05)。p-P70S6K与患者的年龄、性别、淋巴结转移情况及有无脉管瘤栓无相关性,差异无统计学意义(P>0.05)。(5)mTOR及p-p70S6K蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的表达呈正相关关系(rp=0.492,P=0.000)。2 Western Blot结果Western Blot结果显示癌旁组织、食管鳞状细胞癌组织(根据临床分期分为Ⅰ-Ⅱ期食管鳞状细胞癌组及Ⅲ-Ⅳ期食管鳞状细胞癌组)内mTOR及p-P70S6K的蛋白表达。(1)mTOR蛋白水平在各组中表达逐渐升高(0.440±0.023,0.712±0.021,0.836±0.018),差异有统计学意义(P<0.05)。(2)p-P70S6K蛋白水平在各组中表达逐渐升高(0.237±0.011,0.454±0.022,0.620±0.042),差异有统计学意义(P<0.05)。3 RT-PCR结果RT-PCR结果显示癌旁组织、食管鳞状细胞癌组织(根据分化程度分为低分化食管鳞状细胞癌组及高分化食管鳞状细胞癌组)内mTOR及P70S6KmRNA表达水平变化。(1)mTOR mRNA表达水平在各组中逐渐升高(0.484±0.030,0.715±0.018,0.912±0.015),差异有统计学意义(P<0.05)。(2)P70S6K mRNA表达水平在各组中逐渐升高(0.288±0.202,0.643±0.028,0.814±0.189),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:mTOR及p-p70S6K蛋白在食管鳞状细胞癌组织中表达明显升高,且与分化程度、浸润深度及临床分期密切相关,提示mTOR/P70S6K信号通路与食管鳞状细胞癌的发生、发展有关,为临床早期诊断及治疗食管癌提供新的思路。