研究背景大肠癌,严重威胁人类健康的常见恶性肿瘤之一。在全球大肠癌发病率中,男性和女性的大肠癌发病率均居恶性肿瘤的第三位,其死亡率居恶性肿瘤的第四位。据之前的不完全统计,在中国,大肠癌的发病率和死亡率分别居恶性肿瘤的第四位和第五位,且近些年来呈现逐渐上升和年轻化的趋势。其发病机制目前尚不完全清楚,一般认为其发生是一个多因素、多步骤的过程,除饮食、环境、遗传与体力活动等共同参与其发生外,还涉及到多基因改变积累的复杂过程。新近研究表明,细胞周期相关激酶(cell cycle related kinase, CCRK)能够促进细胞的增殖与分裂,正向调控细胞周期进程,并且发现其在多种恶性肿瘤中都伴有过表达；而抑制CCRK基因能使肿瘤细胞周期停滞、细胞克隆形成率和增殖活性降低,CCRK参与的信号通路可能与癌症的成因与演变有关。但目前就有关CCRK基因与大肠癌的发生及其恶性生物学特征的关系尚无报道。为此,我们就CCRK在大肠癌组织中的表达及其与临床病理特征之间的关系进行了研究。目的通过对大肠癌与癌周组织、不同病例分型大肠癌患者中CCRK表达水平的比较,以期进一步阐明CCRK表达与大肠癌发生及其与肿瘤病理分级、转移的关系,寻找大肠癌发生与分期的早期分子生物学指标,为结直肠癌的早期诊断、预后及治疗提供依据。研究方法1.采用RT-PCR法比较检测50例大肠癌及配对癌旁组织中CCRK mRNA的表达水平。2.采用Western-blot法比较检测50例大肠癌及配对癌旁组织中CCRK蛋白质表达水平。3.采用免疫组织化学法检测CCRK在肿瘤不同分期组织中的表达情况。4.统计分析CCRK基因及蛋白质表达水平与患者性别、年龄、肿瘤的大小位置,肿瘤的病理分化,临床分期之间的关系。5.统计学方法采用SPSS17.0软件对所有数据进行统计分析,两组间mRNA测定值和蛋白测定值用χ±S表示,组间比较采用t检验；大肠癌组织与癌旁组织两组之间表达率的比较采用卡方检验,检验水准α=0.05。研究结果1.RT-PCR方法检测结果显示：大肠癌组织中CCRK mRNA的阳性检出率为64%(32/50),明显高于癌旁组织42%(21/50, χ2=4.857, p<0.05), CCRK mRNA在大肠癌组织中的相对表达量(2.45±0.92)也明显高于癌旁组织(1.00±0.21),两者差异具有显著性意义(t=4.83,P<0.05)。2. Western-blot检测结果显示：CCRK蛋白在大肠癌组织中的阳性检出率为60%(30/50),明显高于癌旁组织的40%(20/50),两组之间存在统计学差异(χ2= 5.769, p<0.05)。CCRK蛋白在大肠癌组织中的相对表达量(2.69±0.87)也明显高于癌旁组织(1.00±0.28),两者差异具有显著性意义(t=5.81,P<0.05)。CCRK蛋白在癌旁组织中的表达为弱表达。CCRK蛋白在大肠癌组织以及癌旁组织中的阳性表达情况与mRNA表达情况一致。3.免疫组化的检测结果显示：CCRK蛋白在大肠癌组织切片中的阳性表达主要定位于细胞质和核膜,少量定位于细胞核,CCRK在大肠癌中的阳性表达率为52.7%(79/150),明显高于癌旁组织的35.2%(58/165),两组之间存在统计学差异(χ2=9.810,p<0.05)。4.CCRK表达与临床病理特征的关系：CCRK过表达与患者的临床分期明显相关(P=0.046),PT3-4期大肠癌组织中CCRK mRNA的阳性表达率为85.7%(12/14),明显高于PT1-2期的阳性表达率55.6%(20/36,χ2=3.979,p=0.046)；PN1-2期大肠癌组织中CCRK mRNA的阳性表达率为87.5%(14/16),明显高于PN0期的52.9%(18/34,x2=5.640,p=0.018),提示随着肿瘤的进展,CCRK的表达逐渐上调。而与患者的性别、年龄、肿瘤的大小及位置以及肿瘤分化程度无关(P>0.05)。研究结论1.CCRK的高表达与大肠癌的发生相关,表达量越高,结肠癌发生的概率越大；并且其表达量与其临床分型相关；分化程度越高,表达量越低,提示CCRK对大肠癌的发生、发展具有促进作用。2.CCRK可能成为大肠癌诊断和预后的一项新的参考指标,为大肠癌的早期诊治以及判断疾病的预后提供重要价值。