目的 选用转染乙型肝炎病毒X基因的HepG2(HepG2x)细胞作为体外肝细胞研究模型,观察其表达FasL蛋白的生理效应;检测乙肝患者血清sFas、sFasL的水平,期望进一步阐明乙肝病毒感染慢性肝细胞损害致重症化和肝细胞癌变的发病机制。 方法 1.效靶细胞混合培养后,用DNALadder、Tunel法、透射电镜、免疫组化法及流式细胞仪检测细胞凋亡情况。2.ELISA法检测健康献血员、无症状乙肝病毒携带者、慢性乙型重型肝炎及乙肝病毒相关性肝癌患者血清sFas、sFasL水平。3.用多抗体夹心ELISA法,检测血清sFas-sFasL复合体。 结果 1.与HepG2x细胞混合培养的肝细胞和Jurkat细胞发生凋亡。2.与正常对照组、无症状乙肝病毒携带者比较,慢性乙型重型肝炎患者血清sFas含量为1.44±0.40ng/ml、sFasL含量为0.40±0.13ng/ml均增高,比较差异有极显著性(P<0.01);乙肝病毒相关性肝癌患者sFas含量为1.21±0.34ng/ml明显增高,sFasL含量为0.20±0.07ng/ml较无症状乙肝病毒携带者降低,比较差异有极显著性(P<0.01)。3.在慢性乙型重型肝炎患者血清中检测到sFas-sFasL复合体。4.乙肝病毒相关性肝癌患者外周血淋巴细胞凋亡率为12.1±0.7%,明显高于对照组,比较差异有极显著性(P<0.01)。 结论 1.HepG2x细胞表达的FasL具有致表达Fas的靶细胞凋亡的作用;Apo2.7抗体免疫细胞化学染色法可替代流式细胞仪法原位检测细胞凋亡 2.首次建立了检测sFas-sFasL复合体多抗体夹心ELISA方法,成功检测到血清sFas-sFasL复合体。3.血清sFas、sFasL水平与慢性乙型重型肝炎、乙肝病毒相关性肝癌的发生密切相关。