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树突状细胞(Dendritic cell，DC)是目前功能最强，也是唯一可直接活化初始型T细胞的抗原递呈细胞(APC)。白血病细胞来源的树突状细胞，既携带肿瘤抗原，而且又是功能强大的APC，能激活细胞毒性T淋巴细胞(CTL)，发挥自体抗白血病效应，为白血病的免疫治疗开辟新的途径。本实验研究白血病细胞来源的树突状细胞形态、免疫标记、功能以及分泌IL-12的能力。以24例急性髓细胞白血病(AML)和13例慢性粒细胞白血病(CML)的骨髓单个核细胞为研究对象，并以5例健康献血员的外周血单个核细胞作为正常细胞，诱导扩增DC。比较白血病来源的DC与正常细胞来源的DC在形态、免疫标记的表达和抗原递呈功能方面的差别。 单个核细胞在细胞因子rhGM-CSF 100ng／ml、rhIL-4 50ng／ml和TNF—α 10ng／ml的存在下，培养10—14天作为实验组；不加细胞因子培养相同时间作为对照组。用普通光学显微镜、倒置显微镜、透射电镜观察到实验组的AML、CML细胞和正常单个核细胞在诱导分化过程中均可以聚集成簇，形成集落，边缘的细胞有毛刺状突出，最后可形成具有典型形态的DC。5例正常单个核细胞培养过程中均可以见到DC的典型形态；而24例AML细胞，19例见到DC的形态变化；13例CML 浙江大学硕士学位论文细胞 11 例见到典型的 DC形态。对照组细胞生长缓慢，白血病细胞和正常细胞均没有出现DC的形态变化。 以流式细胞仪检测AML来源的DC免疫标记CD。。、CDs。、CD。。、CD；。、均较对照组明显提高，CDs。（67石9士2437）％VS（1959士 1587）％（T—7刀12，P—0刀001LCDs。（7009士23．92）％VS（2534士1504）％（T—6．703，P—00001）；CD。。（6582士2506）％VS（20．73士1547）％（T—6441P—00001）；CD；。（6265士2545）％VS（2521士Zll6）％（T—4853，P—0．0001）。HLA＊R有上升趋势，（7177士1809）％VS（54．32f38．93）o，但无统计学差异口一l．440，P－0．17）。CML来源的树突状细胞的免疫标记CDs。CDs。CD。。CD；。HLA－DR较对照组均明显提高。CDs。（57、48士2769）％VS（18．83士 19．87）％（T—3812，产一0001）；CD86（6173士28、54）％VS （2449士2587）％（T—3267，产一00037）iCD83（5192上3412）％VS（1761土1676）％（T—3077，P－00071）；CD；。（4726士3560）％VS（1041士952）％（—3482，P—00038）ZHLA－DR（6418土29．43）％VS（1253上1169）％（T—4568，P—00012）。而＊＊卜＊C与＊＊卜＊C相互之间无差异（P＞005）。同样，正常细胞来源的树突状细胞的免疫标记 CD。。CD。。CD。。CD；。HLA－DR均较对照组明显提高。CD。。（60．45士1404）％VS（303士186）％（T—8105，P。00036）；CD。。（8475士1609）％VS （8．90土8、49）％（T—8337，P—00002）二 CD。3（7063上1272）％VS（738士5石0）％以一9057，P—00003）Z CD；。（6885士1231）％VS（8．75士583）％（T—8818，P—0．0001）； HLA－DR（79，57士19．64）％VS（8石4土6．39）％（—6867，P—00005）。＊＊卜＊C、＊＊卜＊C与正常细胞来源的＊C免疫标记相比也无统计学差异（P＞0刀5），说明白血病来源的DC与正常人的DC免疫标记的表达相似。 以荧光原位杂交法（FISH）检测 1例 AML－M3的 PML－RAR a融合基因，对照 2 浙江大学硕士学位论文组阳性率为80％，具有DC典型形态的实验组阳性率为83％。l例CML的BCR－ABL融合基因，对照组阳性率为75％，具有DC典型形态的实验组为70％。结合免疫标记的检测，可证实这类DC是由白血病克隆的细胞分化而来。 白细胞介素 12（IL－12）具有重要的免疫调节功能，可通过诱导 IL－12R的 B 2链上调，促进Thl 细胞的分化，并可诱导CTL细胞的产生，增强NK细胞活性。成熟的 DC可以自分泌的形式分泌 IL－12。我们以 ELISA法检测 AML、CML实验组和对照组的 ILl 2含量，发现 AML－DC、CMLoC均可以分泌 IL－12，其分泌能力较对照组明显增强，AML（2872士2．85）Pg／ml vs（24刀0士444）Pg／gi（T—3．623，P—000if）；CML（27．13士256）pg／il VS（ZI．76士5．80）pg／hl（T—2786，P—0015）。而A＊卜＊C与＊＊LOC之间1卜12的分泌能力相似（P＞005）。 以MTT法检测混合淋巴细胞反应（MLR）中DC刺激异体T淋巴细胞增殖能力。随白血病来源的＊C、正常＊C与T细胞比例上升（＊C：＊一1：100）：50）：10）：1），其刺激T淋巴细胞增殖的能力逐渐增强，且明显比对照组的细胞强人ML 细胞DC：T－1：10O时，OI 86士00叩VS 0193士0052（T－062o，厂一0．339）；DC：T－1：so时，0286士0076 Vs 0258士0043（＊一2009P一0059））＊C：＊一1：ic时，0453士0门9 Vs 0313士0073（一5567，产一00001）；＊C：＊一1：1 时 人．591 土0017 ＊S 0384 士0059（＊一7312，厂一00001）。＊ML细胞，D