研究背景目前研究认为角膜移植免疫排斥反应主要是T细胞介导的迟发型超敏反应,是多种免疫细胞和分子共同参与、相互调节的复杂过程。T细胞活化需要两个信号的参与,即MHC-抗原肽信号和共刺激信号。如缺乏共刺激分子提供的共刺激信号,T细胞便不能活化而处于无能状态。在T细胞活化的不同阶段,多种共刺激分子发挥着重要的调节作用。移植术后,角膜植片朝哪个方向发展是由多种因素所决定的,其中共刺激分子起到了相当重要的作用,决定着T细胞活化后的反应方向。正性共刺激分子可以促进T细胞的增殖,促进植片排斥反应的发生；负性共刺激分子可以抑制T细胞的活化,促进免疫赦免,移植片的存活。B7家族与TIM家族是共刺激分子中非常重要的两类共刺激分子,在启动、维持移植免疫和决定免疫发展方向上起到相当关键的作用。其中共刺激分子B7-H3与TIM-1是最近发现的参与T细胞活化的重要共刺激分子。共刺激通路在多种器官移植免疫反应中发挥重要作用,通过对该通路的干预可有效调节免疫排斥反应,并可从中探索防治免疫排斥反应的策略和手段。同种异体角膜移植是目前治疗角膜盲最为有效的方法,但移植术后排斥反应仍是导致手术失败的主要原因。不断提高角膜移植的成功率是临床亟待解决的问题。因此加强对角膜移植免疫排斥反应机理的研究,以及从多种途径积极探索良好的抗排斥反应手段具有非常重要的理论与现实意义。第一部分B7-H3在小鼠角膜移植免疫赦免中的作用探讨目的探讨共刺激分子B7-H3在小鼠角膜中的表达情况以及在角膜移植免疫赦免中的作用。方法实验研究。以C57BL/6小鼠为供体、BALB/c小鼠为受体建立角膜移植实验模型,采用简单随机抽样方法设计方案,取8只未行角膜移植的BALB/c小鼠作为正常对照组,另取8只BALB/c小鼠作为自体角膜移植组,最后30只BALB/c小鼠进行同种异体角膜移植；按Sonoda法观察小鼠角膜移植后的存活率,8周内植片混浊评分≥12分判定为排斥组,8周时未达到2分的认为是存活组；各组各取3只眼球,HE染色后行组织病理学观察并行B7-H3分子的免疫组织化学检测；各组各取5只眼角膜,行荧光定量PCR检测B7-H3分子mRNA的表达情况。各组角膜组织中的B7-H3mRNA表达差异倍数比较采用设计单因素的方差分析,组间的多重比较采用LSD-t检验。结果同种异体角膜移植组并未完全排斥,30只小鼠中有9只存活,21只排斥,移植存活率为30%；自体角膜移植组移植存活率为100%；免疫组化表明B7-H3分子在正常对照组和自体角膜移植组的角膜上皮、内皮细胞和虹膜睫状体中均有表达,在存活组中的表达明显增加,而在排斥组中的表达明显减少；qPCR检测在正常对照组(4.30±0.023)和自体角膜移植组(4.33±0.031)中均可以检测出B7-H3分子mRNA的表达；同种异体角膜移植排斥组(3.89±0.037)B7-H3分子的mRNA表达程度明显下降；但在同种异体角膜移植存活组(5.04±0.058)中B7-H3分子的mRNA表达明显增加；将各组B7-H3mRNA的表达差异进行统计学分析,先进行方差齐性检验(F=429.546),再采用LSD法进行两两比较,除了正常对照组与自体角膜移植组之间差异无统计学意义之外(P=0.387),其余各组之间均有统计学意义,C组与A组之间P=0.001,C组与R组之间P=0.003(P<0.01)。结论B7-H3分子在促进角膜移植的免疫赦免中发挥一定的作用,可能是维持移植角膜免疫耐受状态的重要因子之一。第二部分Tim-1共刺激分子参与大鼠角膜移植排斥反应中的研究·目的共刺激分子Tim-1在大鼠角膜中的表达情况以及在角膜移植排斥反应中的作用。方法以SD大鼠为供体,Wistar大鼠为受体建立角膜移植实验模型。采用完全随机分组设计方案,将40只大鼠分为三组,C组为正常对照组(8只),Ⅰ组为Wistar自体角移组(16只),A组(各16只)为SD-Wistar同种异体角膜移植组。根据排斥反应评分系统,判断术后植片排斥情况。观察各组角膜植片的平均存活时间和植片存活率。术后7、14天三组各取3只大鼠眼球进行组织病理切片,以及免疫组化检测共刺激分子Tim-1在各组中表达情况,术后7、14天各组取5只大鼠角膜,采用荧光定量PCR检测共刺激分子Tim-1mRNA表达变化。结果自体角膜移植(Ⅰ)组移植存活率为100%,同种异体角膜移植(A)组100%排斥；术后7d免疫组化表明Tim-1分子在正常组(C组)中少量表达,在自体角膜移植组(Ⅰ组)和同种异体角膜移植(A)组的角膜上皮、基质、内皮细胞中表达均明显增强；术后14d,免疫组化观察到Tim-1在Ⅰ组中的表达明显减少,而在A组中仍然呈高表达；qPCR检测术后7d,正常C组中Tim-1mRNA少量表达,在自体角膜移植组(Ⅰ组)和同种异体角膜移植(A)组中Tim-1mRNA表达均明显增加,A组增高更明显；术后14d,qPCR检测到Ⅰ组中Tim-1mRNA量明显下降,而A组中Tim-1mRNA仍然持续的高表达。结论共刺激分子Tim-1可能在引发创伤炎症反应早期中起到重要作用,而且可能介导了角膜移植术后的排斥反应。