快速检测禽流感病毒及血清抗体的胶体金免疫层析法的建立

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禽流感(Avian Influenza,AI)是由禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV)引起的传染病,鸡、火鸡、鸭、鹌鹑等家禽和野禽均易感,是目前危害养禽业最严重的疫病之一,近年来给全球养禽业造成了巨大的经济损失,并引起了人的感染和死亡,因此在公共卫生上也具有重要意义。目前,禽流感的诊断方法主要包括病毒分离,血清学试验和分子生物学试验,但是其中许多检测方法由于检测时间较长或所需仪器设备较昂贵,多数难以适于临床快速检测。80年代发展起来的胶体金免疫层析技术(GICA)具有成本低廉、操作简便、易于大量样本的检测等优点,本研究运用该技术,建立了检测禽流感血清抗体的间接胶体金免疫层析法和检测禽流感病毒的单抗夹心胶体金免疫层析法,可用于禽流感的病原及其血清抗体的快速检测。1快速检测禽流感血清抗体的胶体金免疫层析法的建立将杆状病毒表达系统表达的AIV重组核蛋白包被于硝酸纤维膜(NC膜)上,作为检测线(T线),羊抗兔IgG抗体包被作为质控线(C线),制备胶体金并标记兔抗鸡IgG抗体,将金标复合物吸附于玻璃纤维,制成金标垫,组装胶体金试纸条检测卡,建立了快速检测禽流感血清抗体的间接胶体金免疫层析法(GICA)。如果检测结果为抗体阳性,则C线和T线均呈现红色,如果结果为抗体阴性,则仅有C线出现红色。运用GICA、血凝抑制试验(HI)和琼脂扩散试验(AGID)三种方法对342份临床鸡血清样品进行平行检测,GICA的阳性检出率为69.88%,而HI和AGID的阳性检出率分别为78.65%和59.36%;GICA与HI的符合率为89.47%,与AGID的符合率为84.21%。另外,运用检测卡对SPF鸡血清、鸡新城疫、鸡传染性支气管炎,鸡传染性法氏囊,产蛋下降综合征阳性血清进行检测,结果为阴性,证明该方法具有较好的特异性。上述结果表明,GICA可用于鸡禽流感血清抗
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