海绵状白腐菌木质纤维素酶活性及其基因的遗传变异研究

来源 :东北林业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:pommylo
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本论文以在帽儿山采集的3种海绵状白腐菌(彩绒革盖菌、火木层孔菌、松杉灵芝)为研究对象,利用菌丝直径测量法比较菌丝在PDA固体培养基上的生长速度,利用菌丝体干重称重法测定白腐菌在液体培养基上的生物量变化,利用比色法测定白腐菌5种木质纤维素酶酶活情况,并且运用TRAP标记研究这三种白腐菌木质纤维素降解相关酶基因的多态性,从而分析比较菌种间的遗传变异情况,具体研究结果如下:1、三种白腐菌在PDA培养基上的生长速度测定不同温度下(23℃、28℃),3种白腐菌间的生长速度比较结果都为彩绒革盖菌>火木层孔菌>松杉灵芝。生长速度最快的是彩绒革盖菌,火木层孔菌次之,松杉灵芝最慢。其中,彩绒革盖菌和火木层孔菌在28℃时较23℃生长更快,说明这两种菌的最适温度为28℃;而松杉灵芝对23℃更敏感,生长更为迅速,说明松杉灵芝的最适温度为23℃。2、三种白腐菌在液体培养基中生物量的变化白腐菌在液体培养基中生长速度与PDA培养成正比。生物量比较为彩绒革盖菌>火木层孔菌>松杉灵芝。彩绒革盖菌生长最快,生物量最先达到最大值;火木层孔菌次之,生物量增长平缓;松杉灵芝最慢,12天达到最大值时仅为彩绒革盖菌和火木层孔菌同期的28.57%和40%。3、三种白腐菌木质纤维素降解酶酶活比较三种白腐菌产生的漆酶的酶活最强,木质素过氧化物酶酶活次之,锰过氧化物酶活最低。三种白腐菌产生的木质素过氧化物酶在木屑诱导下酶活均高于对照样(无木屑),且三种菌受木屑诱导处理间的差异显著,其中彩绒革盖菌最为突出。三种白腐菌产锰过氧化物酶能力从高到低依次为彩绒革盖菌、火木层孔菌和松杉灵芝。漆酶酶活受木屑诱导显著,且随生长天数递增。三种白腐菌产生的内切β-葡聚糖酶在玉米秸秆处理下酶活普遍高于木屑处理,产生的外切p-葡聚糖酶在培养期都有相同的生长趋势,即在玉米秸秆为碳源时酶活随培养时间的增加而降低,木屑为碳源时前两天酶活变化不明显,随后降低。4、利用TRAP标记检测三种白腐菌木质纤维素酶基因的多态性通过预实验筛选,从64对引物中确定具有较好条带的19对引物,以三种白腐菌基因组DNA为模板,进行TRAP-PCR扩增,电泳后共产生353条条带,多态性条带为249条,多态性百分率为70.54%,该结果显示三种白腐菌间的遗传差异较高,易引起遗传变异。
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