人白细胞介素18基因的克隆与表达

来源 :黑龙江八一农垦大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yy20090907
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
白细胞介素18(interleukin-18,IL-18)是一种新发现的具有多种活性的细胞因子,在结构上与IL-1相似,在功能上与IL-12相似,其最具特征的活性是诱导γ-干扰素(IFN-γ)的产生,促进T细胞和自然杀伤(NK)细胞的增殖,同时增强NK细胞的杀伤力,并具有抗肿瘤和抗微生物感染等多种疾病的作用,这些特性预示IL-18可做为一种治疗因子,因此对该因子的克隆与表达在实际应用于临床之前有重要的意义。本研究应用现代分子生物学的研究手段和方法研究了如下内容: 1.人白细胞介素18基因的克隆及序列分析从正常人肝脏组织中提取RNA,然后反转录成cDNA,应用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术,自行设计并合成一对特异性引物,成功地扩增出hIL-18cDNA基因,并定向插入pGEM-T载体中,然后经PCR鉴定及限制性内切酶双酶切鉴定,鉴定正确的质粒进行序列测定,用DNAstar软件将所测得的序列与原预期基因序列比较,核苷酸序列基本一致,表明所构建的人白细胞介素18基因序列是正确的。 2.人白细胞介素18基因在大肠杆菌中的表达及其多克隆抗体的制备在获得人白细胞介素18基因重组质粒pGEM-T-hIL-18的基础上,成功地构建了重组表达质粒pET-28a-hIL-18,将阳性重组质粒转化表达受体菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达,进行表达产物的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测。结果表明,表达的蛋白带位于约20KDa处,hIL-18基因获得高效表达。表达的蛋白经透析袋电洗脱法纯化后,对獭兔进行常规免疫,应用ELISA检测到较高的多克隆抗体效价(1:25600),表明此蛋白具有良好的免疫原性。Western-blot结果显示,利用纯化包涵体制备的兔抗血清可以很好地和所表达的蛋白带特异性结合。 3.人白细胞介素18基因与报告基因pECFP-C1-hIL-18的构建利用RT-PCR方法扩增人白细胞介素18基因片段,克隆至pGEM-T载体,鉴定和测序正确的人白细胞介素18基因亚克隆入带有绿色荧光蛋白的真核表达载体pECFP-C1的多克隆位点EcoRI和SalI之间,成功构建融合有报告基因的人白细胞介素18基因真核重组表达载体pECFP-C1-hIL-18。 本研究获得了人白细胞介素18基因、原核表达载体以及融合有报告基因pECFP-C1的真核表达载体,并且获得了该基因在大肠杆菌中的高效表达。为IL-18生物学特性及其应用奠定了基础。
其他文献
海洋牧场不仅仅可以创造经济价值,也可以起到资源养护以及海域修复等作用.因此提升现代化海洋牧场的建设对推进海洋经济发挥在那以及落实生态明文建设有着十分重要意义,本文
目前的电子信息通信工程已经取得了很大的进展,但电子的干扰问题一直是通信工程中的一大难题.因此要想确保设备抗干扰接地方法的有效性,就要在具体的操作过程中,严格规范进行
轮状病毒(Rotavirus,RV)是呼肠孤病毒科轮状病毒属的成员,是世界范围内引起婴幼儿及多种幼龄动物急性病毒性腹泻的主要病原体之一。其感染广泛,发病率也相当高,5岁以下的婴幼儿90
猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的猪的一种高度接触性传染病,以母猪的生殖障碍和生长猪及仔
对企业资产、财务进行科学评估可以帮助企业明确自身发展具体情况,也为企业市场综合竞争力的提升提供信息依据.所以现阶段企业财务管理工作的开展逐渐受到企业高层的重视.而
随着新时期科学技术和社会经济的快速发展,人们的生活水平不断提高,对电气工程的要求也在增加.传统的电气工程已经不能满足当前社会发展需求了,电气自动化技术具有智能化、多
本文对修改其他债务条件下债务重组会计处理存在的困难题进行分析,并根据提出修改建议,以期为类似业务的会计处理提供借鉴.
在我国经济不断发展的大背景下金融行业也在蓬勃发展,但是,由于相关的监管机制不到位,近年来很多金融企业风险频发,对金融行业整体的良性发展非常不利.我国在深化金融体系改
在社会经济水平显著提升的背景下,出现了完善的监督体系,推动我国财务管理的变化,随着时代的不断发展,已经不能使用传统的会计管理方法.伴随新会计准则的出台,直接影响到企业
随着第三方支付规模的迅速增长,商业银行活期存款、个人消费贷款和支付清算等业务都受到了较大冲击,银行利润增长压力增强.因此商业银行应利用人才和资金优势,积极创新产品,