糖肽类抗生素分子印迹膜的制备和应用

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替考拉宁(TE)和万古霉素(VCM)是目前在临床上用于治疗重症革兰氏阳性菌感染常用的糖肽类抗生素。TE是浓度依赖型抗生素,血药浓度直接影响了它对细菌的抑制效果。而高浓度VCM会产生不良反应,如耳毒性、肾毒性,发生概率会随着VCM的浓度增加而增大。因此,在临床应用中,TE和VCM的血药浓度检测具有重要的意义。分子印迹由于其低成本、高选择性、重复利用性等优点被广泛用于药物分析领域。本课题分别以TE和VCM为模板制备了分子印迹膜(MIM),并用于TE和VCM在生物样本中的药物浓度检测。在TE MIM制备部分,以TE为模板分子,制备了以三种不同材质的市售微孔滤膜(尼龙(NN),聚丙烯(PP),聚偏氟乙烯(PVDF))为支撑的MIM。通过吸附实验和扫描电镜(SEM)观察,确定PVDF为最佳支撑材料。平衡吸附实验和吸附动力学实验的结果表明TE PVDF MIM的最大负载量为85ug/cm~2,最佳吸附时间为90min。以10%乙酸甲醇溶液(v:v)为洗脱剂,绘制了UV标准曲线Y=0.0093X+0.0131,R~2=0.9995。以结构相似的VCM作为干扰项进行选择性吸附实验,结果表明,当溶液中存在少量相似结构的物质,TE PVDF MIM对TE的选择性识别吸附不受影响。在解吸附实验中,最佳解吸附时间为30min。采用PVDF MIM吸附TE,洗脱后UV检测洗脱液中TE浓度,换算出TE回收率,回收率为96-98%。以胎牛血清为基质的生物样本检测结果也证明了这种检测方法的可行性。在VCM MIM的制备部分,以VCM为模板分子,采用Gaussian模拟了VCM与AAM的结合位点以及结合方式,得到了VCM与AAM的最佳摩尔比。基于Gaussian模拟结果,制备了以三种不同材质的市售微孔滤膜(尼龙(NN),聚丙烯(PP),聚偏氟乙烯(PVDF))为支撑的VCM MIM。通过吸附实验和扫描电镜(SEM)观察,在确定NN MIM和PVDF MIM上都成功的合成了印迹层,但PVDF MIM对溶液的VCM吸附效果更好。平衡吸附实验和吸附动力学实验的结果表明,VCM PVDF MIM的最大负载量为23.8 ug/cm~2,最佳吸附时间为120min,且VCM PVDF的分子印迹空白膜(NIM)对VCM基本没有吸收。以结构相似的TE作为干扰项进行选择性吸附实验,结果表明,当溶液中存在少量相似结构的物质时,VCM PVDF MIM对VCM的选择性识别吸附能力不受影响。洗脱剂筛选实验结果表明,0,1mol/L KOH水溶液和甲醇体积比为1:4时洗脱效果最佳,并且制备了这种洗脱液的UV标准曲线Y=0.0311X+0.0724 R~2=0.9990。在解吸附实验中,最佳解吸附时间为20min。采用VCM PVDF MIM吸附VCM,洗脱后UV检测洗脱液浓度,换算得到VCM浓度的回收率,回收率为85-99%。以胎牛血清为基质的VCM生物样本浓度检测,结果表明,这种检测方法是可行的。
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