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研究背景：1尿路上皮癌(urothelial carcinoma, UC)是我国发病率最高的泌尿系统肿瘤。尽管大部分UC可以通过手术得到治疗,然而UC的高复发率经常使病人感到沮丧。因此,如何对UC作出早期诊断和有效的预防UC的复发已成为泌尿外科迫切解决的重要间题；2目前内镜检查(包括膀胱镜检查和输尿管镜检查)及尿脱落细胞形态学检测是UC临床诊断和监测复发普遍使用的两种手段。然而细胞形态学检测敏感性低,内镜检查则为有创检查,病人痛苦,难以接受；3随着对膀胱UC遗传学改变的深入研究,研究者发现9号染色体部分(如p16位点)或全部丢失是最常见遗传学改变,且这一改变与膀胱UC的早期发生密切相关。3号、7号及17号染色体的非整倍性与膀胱UC的发展密切相关。研究目的：1通过对UC患者(包括膀胱UC和上尿路UC)尿液的荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization, FISH)检测分析,并将其结果与尿脱落细胞形态学结果进行比较分析,评价FISH检测方法在该类疾病诊断中的应用价值；2通过应用FISH技术检测经尿道膀胱肿瘤电切术(transurethral resection of bladder tumor, TURBT)后患者定期随访时的尿液,并将其结果与同期的膀胱镜检结果进行比较,分析二者的一致性,评估FISH技术在膀胱UC术后监测中的价值；3计算中国人群中UC患者尿液脱落细胞中3、7、17号染色体和p16基因(9p21)位点的畸变率。为中国UC患者建立一种无创伤性和痛苦性,但具有高特异性、高灵敏性的早期诊断方法的提供临床依据；4进一步建立标准化的样本处理、质量控制及规范FISH操作程序,为临床推广应用奠定基础。研究方法：1标本采集对象：我院2007年10月至2009年12月期间99例膀胱UC患者、23例非尿路上皮癌的血尿患者、26例可疑上尿路UC患者、20例泌尿系良性疾病或正常人(用于建立阈值)以及56例膀胱UC患者行TURBT术后3个月、6个月、9个月及12个月的晨起尿液50-800ml；2 FISH检测：上述尿液标本经一系列专门处理后的脱落细胞进行FISH检测,FISH检测采用荧光标记DNA探针混合物与细胞核上3、7、17号染色体着丝粒和p16基因(9p21)位点进行杂交,其中3、7号染色体着丝粒探针为一组,17号染色体着丝粒和p16基因(9p21)位点探针为一组。应用计算机图象分析系统对所见信号进行分析,其结果根据细胞核的荧光信号数以及异常细胞的比例进行判别；3评估方法：99例膀胱UC患者、23例非尿路上皮癌的血尿患者、26例可疑上尿路UC患者、20例泌尿系良性疾病或正常人连续三次的晨起尿液100ml行脱落细胞形态学检查,其结果与FISH结果进行比较,主要包括总的敏感度与特异度以及各期、各级的敏感度。56例膀胱UC行TURBT术后的患者在3个月、6个月、9个月及12个月时同期行膀胱镜检,膀胱镜检发现肿物即取病理活检,镜检结果与FISH结果进行一致性分析；4统计学方法：均采用SPSS 13.0统计软件进行分析。FISH检测与脱落细胞形态学的各种评价指标均为计数资料,以百分率表示,采用χ2检验,当n<40时则采用Fisher确切概率检验,检验水准为α=0.05。56例膀胱UC行TURBT术后的患者,膀胱镜检结果与FISH结果采用Kappa检验,分析其一致性,检验水准为α=0.05,Kappa值≥0.75时,两者一致性较好,0.75>Kappa值≥0.4时,两者一致性一般,Kappa值<0.4时,两者一致性较差。结果：1膀胱UC患者尿脱落细胞FISH总的敏感度和特异度分别为81.8%和95.3%,G1、G2、G3各级的敏感度分别为54.8%、89.5%、100%,Ta、Tis、T1、T2-4各期的敏感度分别为35.7%、100%、85.7%、97.9%；尿脱落细胞形态学分析总的敏感度和特异度分别为39.4%和93.0%,G1、G2、G3各级的敏感度分别为3.2%、34.2%、83.3%,Ta、Tis、T1、T2-4各期的敏感度分别为0、100%、22.9%、60.4%；高分期、分级膀胱UC的FISH检测敏感度均非常高,低分期、分级的敏感度明显高于细胞形态学(P<0.05),两者的特异度相当；3、7、17号染色体和p16基因(9p21)位点的畸变率分别为70.7%(70／99),68.7%(68／99),80.8%(80／99)和57.6%(57／99)。2上尿路UC患者尿液脱落细胞FISH和细胞形态学检测上尿路UC总的敏感度分别为90.9%(20／22)和59.1%(13／22),FISH敏感度较高(P<0.05),特异度分别为100%(24／24)和95.8%(23／24),两者差异无显著统计学意义(P>0.05)。上尿路UC的3、7、17号染色体和p16基因(9p21)位点的畸变率分别为90.9%(20／22)、86.4%(19／22)、63.6%(14／22)和68.2%(15／22)。3膀胱UC患者行TURBT术后3、6、9、12个月行尿液FISH检测为阳性8例,膀胱镜检发现5例复发。经统计学一致性分析,FISH的检测结果与膀胱镜结果一致性Kappa值为0.604(P<0.001)。结论：1 FISH检测比细胞形态学提高了膀胱UC患者检测敏感度,而两者特异度相近,使低级别浅表型膀胱UC的准确率明显提高,几乎能检测出所有高分期、高级别的浸润型膀胱UC, FISH检测作为诊断膀胱UC的一种无创方法明显优于细胞形态学,但不能完全替代膀胱镜检来诊断膀胱UC；2 FISH检测对诊断上尿路UC有较高的敏感度和特异度,其敏感度明显高于尿脱落细胞形态学,而特异度则与之相近。比较细胞形态学,FISH检测可作为上尿路UC的一种有效而无创诊断手段；3本研究人群中UC患者尿液脱落细胞3、7、17号染色体和p16基因(9p21)位点的畸变率较高,UC患者与尿路上皮细胞的基因突变有关,用FISH方法对UC患者尿液进行检测分析来诊断UC是可行的；4 FISH在TURBT术后的监测中有较好的应用价值,也许该方法能较早发现膀胱肿瘤的复发,但尚不能完全替代膀胱镜检。课题来源：1国家卫生部科研究基金课题(基金编号：WKJ2007-3-001)：“荧光原位杂交技术在产前遗传性疾病及部分肿瘤检测的多中心临床应用研究”的子课题之一“荧光原位杂交技术在膀胱癌检测中的临床应用研究”；2广东省医学科研基金课题(基金编号：B2009199)：“荧光原位杂交(FISH)技术在膀胱癌术后监测中的应用研究”。