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目的：1、检测阻断hedgehog通路对大肠癌细胞SW480、caco2的影响。2、研究大肠癌细胞SW480、caco2中hedgehog激活机制的的差异。方法：1、培养人大肠癌SW480、caco2细胞,倒置显微镜下观察并记录细胞形态。2、加入不同浓度(40、30、20、10、5、2.5)μmol/L cyclopamine(环靶明),作用不同时间(24、48、72)小时后：(1)观察并记录细胞形态改变；(2)MTT法检测吸光度,代入公式计算细胞增殖抑制率；③Annxin-V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡百分率。3、设计并构建针对Gli1的miRNA干扰载体,转染SW480细胞,RT-PCR方法检测Gli1 mRNA表达；MTT法检测细胞增殖抑制率。结果：1、环靶明处理前后：(1)细胞形态变化：①未经处理大肠癌细胞系caco2形态呈梭形或多边形贴壁生长,细胞间隙较小；SW480细胞呈多边形或不规则三角形贴壁生长,细胞连接较为紧密。②环靶明作用24小时后,caco2细胞变短,细胞间隙变大,部分细胞,随药物浓度增加及作用时间延长,细胞形态变化更加显著,部分细胞失去胞增殖抑制率达83.69%。环靶明对SW480细胞增殖无明显影响(p>0.05)。(3)环靶明对caco2细胞凋亡的影响：不同浓度(40μmol/L、20μmol/L、10μmol/L)环靶明作用于caco2细胞,48小时后,细胞凋亡百分率分别为64.03%、50.47%、31.7%,明显高于空白对照组的14.44%,差异有显著性(P<0.05)。2.成功构建针对Gli1的miRNA干扰载体p-Gli1及阴性贴壁能力,呈圆形；SW480细胞形态无明显变化。(2)环靶明对caco2及sw480细胞增殖影响：环靶明对caco2细胞增殖抑制作用随浓度增加及作用时间延长而增大,最明显的时间为72小时,最强抑制浓度为40μmol/L,细对照载体P-negative,质粒p-Gli1、P-negative抽提后电泳,测序,结果与设计序列比对,证实所插入序列完全正确。3、干扰Gli1后：(1)与阴性对照相比,转染Gli1 miRNA干扰载体48小时后,RT-PCR检测结果显示SW480细胞中Gli-1 mRNA表达水平下降达80%；(2)SW480细胞形态变化：与空白对照相比,转染阴性对照质粒对SW480细胞形态无影响。P-Gli1质粒转染sw480细胞,48h后,细胞变细,细胞间隙变大,部分细胞呈圆形；(3)与阴性对照组相比,干扰Gli1 mRNA表达后SW480细胞增殖明显受抑,细胞增殖抑制率达37.44%,差异有显著性(P<0.05)。结论：阻断hedgehog通路对大肠癌细胞系caco2、SW480的增殖均有抑制作用；caco2、SW480的增殖均受hedgehog通路调控。阻断hedgehog通路抑制caco2细胞增殖的机制与启动细胞凋亡有关。环靶明从smo水平阻断hedgehog通路可抑制caco2细胞的增殖,证明caco2中hedgehog激活起始点位于smo水平以上。对于sw480细胞,环靶明无效,但干扰Gli1可抑制细胞的增殖,提示sw480细胞中Gli1可能存在旁路激活。本研究初步探讨了在不同大肠癌细胞中hedgehog信号通路激活机制的差异,为进一步研究在大肠癌中hedgehog通路与其他信号通路的交叉作用奠定了基础。