黄绿青霉素(citreoviridin,CIT)是黄绿青霉的次级毒性代谢物,由吡喃酮色基、一部分多烯烃和氢呋喃环三部分组成,广泛存在于低温高湿度地区被黄绿青霉污染的谷物中.黄绿青霉素是神经毒真菌毒素,也是心肌毒真菌毒素,可引起生物机体广泛的损伤.同时,黄绿青霉素还是线粒体可溶性ATP酶的强效抑制剂,可抑制牛心肌和大鼠肝脏线粒体中ATP酶活性.该课题从CIT的生物合成及检测、致离体心肌细胞和实验动物心肌损伤的实验观察,以及CIT污染水平的流行病学检测四个层次系统地探讨CIT对大鼠心肌的损伤作用.结果如下:1.黄绿青霉素的生物合成和纯化.市售玉米加入30﹪水分,接种黄暗青霉菌孢子后,15-25℃培养3周,获得的黄绿青霉素产量较高.霉变米粉经乙醇提取两次,减压浓缩后,溶解于热苯中,4℃过夜并过滤,滴加正己烷于黄色苯溶液中,将生成的黄色沉淀通过硅胶柱,在正己烷:丙酮(1:1,V/V)中展开并蒸干,溶于甲醇中,形成黄色粉末.最终合成的黄绿青霉素成分单一,所含杂质较少.2.粮样中黄绿青霉素检测的高效液相色谱方法的建立.色谱条件为:Hypesil SiO<,2>色谱柱(4.6mm×150mm,5um),流动相为乙酸乙酯:正已烷(7:3,V/V),流速为0.5ml/min,检测波长388nm,柱温为室温,检出限10ng/g.低剂量标准曲线R<,1>=0.999,Se<,1>=0.015532;高剂量标准曲线R<,2>=0.999,Se<,2>=0.03024.回收率82.5﹪-96.1﹪.可用于地方病区粮食中黄绿青霉素污染水平的检测评价.3.黄绿青霉毒致离体心肌细胞毒性检测.黄绿青霉素具有致心肌细胞DNA损伤的作用,13.0uM CIT处理组细胞发生凋亡,而2.6uM、1.3uM、0.625uM CIT处理组,未观察到明显的拖尾现象.经MTT法检测,CIT对离体心肌细胞的半数致死剂量(LD<,50>)为152.8uM.电镜下,高剂量(12.5uM)处理组,完整的心肌细胞结构未见,细胞功能状态不佳.低剂量CIT(2.5uM)处理组,肌细胞为不规则形,细胞核内高密度的染色质边集核膜下,核周Z线结构清晰,肌丝明显,胞质内存在脂滴颗粒,线粒体嵴清晰,部分线粒体出现空泡变性.4.CIT对大鼠损伤观察.15mg/kgCIT可使大鼠心肌发生变性和坏死,呈灶状或条索状分布,涉及面较大,有多量淋巴细胞和单核细胞浸润,肌原纤维凝集崩解,部分心肌细胞颗粒或空泡变性.电镜下观察,实验组心肌细胞核固缩,肌丝溶解,结构明显紊乱,Z线增粗,线粒体数量明显减少.CIT可使大鼠血清中乳酸脱氢酶、谷草转氨酶、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶及肌钙蛋白T含量增多,均存在统计学意义.5.黑龙江省十四市县市售粮食中CIT污染水平的检测.该次研究显示,每克市售粮食中CIT含量不足10ng.