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目的:
观察肿瘤发生的早期邪毒壅盛证和气虚证等同病异证H22肝癌小鼠下丘脑钙离子信号通路等基因差异表达的特征,揭示肝癌同病异证发生的物质基础。
方法:
(1)先后于2006年和2009年,分别采用小鼠标准化、计量化诊法,筛选获得同病异证H22荷瘤小鼠,即早期邪毒壅盛证和气虚证荷瘤小鼠,与无证候的正常小鼠对照,综合采用Affymetrix基因芯片等技术,检测两批实验下丘脑基因表达;重点观察芯片数据中钙离子信号通路、三羧酸循环通路和细胞凋亡通路等基因的差异表达,通过分析下丘脑信号传导、能量消耗和细胞凋亡等基因变化,探讨同病异证H22荷瘤小鼠下丘脑基因差异表达的特征。
(2)2011年,采用小鼠标准化、计量化诊法方法,筛选获得同病异证H22荷瘤小鼠,即邪毒濒危组(邪危组)、邪毒壅盛证组(邪毒组)、邪毒居中组(邪中组)、邪毒微弱(邪微组)等4个不同程度的肿瘤邪毒组,以及邪毒居中兼气虚组。RTqPCR检测下丘脑钙离子信号通路、三羧酸循环通路和细胞凋亡通路部分功能明确的高表达差异基因进行进一步观察。
结果:
(1)不同批次实验,H22肝癌小鼠肿瘤发展的进程不同,2006批实验小鼠疾病较轻;2009批实验小鼠疾病发展较快;2011批实验小鼠疾病发展更快,气虚证程度重且兼邪毒壅盛证;不同批次实验小鼠证情严重程度不同对基因差异表达产生了影响。
(2)筛选到不同程度的邪毒证、气虚证荷瘤小鼠,芯片检测发现2006、2009两批实验小鼠部分基因一致存在邪毒期、气虚证期的表达差异,充分展现出肝癌同病异证复杂的物质基础。邪毒证、气虚证的表现与信号通路基因表达的变化、能量代谢调节及细胞凋亡与新生具有一定相关性。
(3)2011批荷瘤小鼠RTqPCR观察部分高表达基因在邪毒证期与气虚证期存在同病异证差异表达,与2006、2009两批实验芯片结果有一定的关联性。
结论:
(1)同病异证肝癌H22荷瘤小鼠在下丘脑层面具有基因差异表达的物质基础。邪毒证表现为信号传导通路基因表达紊乱,随着邪盛衰度增加,信号传导通路抑制加重,而能量代谢通路和细胞周期凋亡通路等趋向活跃;气虚证相关通路基因表达多呈轻度抑制。这些构成了H22荷瘤小鼠下丘脑差异基因表达同病异证的特征。
(2)因此,对于肝癌治疗而言,消除和抑制肿瘤增殖,以及减缓肿瘤引发的疼痛等慢性应激,是十分必要的;对于气虚证而言,补益正气是有益的。