论文部分内容阅读
目的通过不同浓度益生菌治疗结肠炎大鼠后各组大鼠病理学改变、炎症因子表达水平的改变和肠道菌群的变化探索益生菌治疗结肠炎的最佳剂量和肠道菌群的变化,为今后临床诊断和治疗UC提供理论依据。方法1.实验分组:39只Sprague-Dawly大鼠随机分成空白对照组、DSS造模组、生理盐水组、低浓度治疗组、中浓度治疗组、高浓度治疗组、热灭活治疗组。2.研究对象:结肠炎大鼠及其粪便和大鼠结肠组织。3.检测内容和方法:实验期间观察大鼠饮食、活动等一般情况,监测体重,观察粪便性状及有无隐血,进行DIA评分。解剖大鼠后对结肠进行大体损伤形态评分和病理学评分,并通过免疫组化方法检测细胞因子水平。粪便标本先通过涂片革兰染色镜检法进行菌群分析,然后通过传统的细菌培养鉴定法进行需氧和厌氧培养,最后通过实时荧光定量PCR方法检测粪便中6种细菌的毒素基因,包括肠产毒性大肠埃希氏菌不耐热肠毒素LT基因、肠侵袭性大肠埃希氏菌质粒携带的毒力因子vira基因、脆弱拟杆菌肠毒素bft基因、产气荚膜梭菌外毒素cpa基因、艰难梭菌毒素A(cdtA)基因和毒素B(cdtB)基因。4.统计学处理:采用SPSS19.0统计学软件包进行数据分析。结果1、造模结束时,DSS造模组大鼠DIA评分达到6.6±1.1402,明显高于空白对照组;病理学评分达8.75±0.5,明显高于空白对照组。2、未接受益生菌灌胃治疗的DSS造模组大鼠一般状况最差,部分大鼠出现黏液脓血便或血便,空白对照组大鼠无异常表现,其余治疗组大鼠一般状况介于空白对照组和模型组之间。各治疗组DAI积分也随着治疗时间的延长呈现下降趋势,治疗结束时,各治疗组DAI积分明显低于DSS造模组,高于空白对照组。3、经过益生菌治疗后,各个治疗组大鼠的结肠炎症病变程度较DSS造模组明显减轻,且中剂量治疗组和高剂量治疗组大鼠结肠损伤程度减轻更加明显。且经过益生菌治疗后,各治疗组大鼠的结肠黏膜病理学评分相比DSS造模组大鼠均有不同程度的降低,结肠黏膜的糜烂溃疡灶及隐窝炎和隐窝脓肿减少,病变范围缩小,肠上皮破坏程度减轻,仅部分腺腔的上皮细胞有坏死,炎症细胞浸润亦有减少。4、免疫组化检测炎症因子显示,DSS造模组大鼠结肠促炎因子TNF-α、IL-6水平最高,抗炎因子TGF-β、IL-10水平最低。经益生菌治疗后,各治疗组促炎因子TNF-α、IL-6水平较DSS造模组有明显降低,抗炎因子TGF-β、IL-10水平明显升高。且高浓度的益生菌抗炎因子水平升高更加明显。5、粪便菌群涂片结果显示各治疗组菌群失调率低于DSS造模组。各治疗组的菌群失调程度低于DSS造模组,明显高于空白对照组。粪便培养与鉴定的结果表明,各治疗组条件致病菌优势生长率低于DSS造模组,益生菌优势生长率高于DSS造模组。结论1、DSS造模方法可成功诱导结肠炎大鼠模型。2、不同剂量的益生菌对结肠炎大鼠UC临床症状缓解程度不同,高剂量的益生菌VSL#3(10.8×1011CFUKg/天)效果最为明显,中剂量(1.08×1011CFUKg/天)次之,低剂量(0.108×1011CFUKg/天)和热灭活的益生菌效果较一般。3、益生菌能修复结肠炎大鼠炎症组织损伤,缓解大鼠炎症症状,有效降低结肠组织促炎因子IL-6, TNF-α的含量,抑制此类促炎因子的分泌,;提高抗炎因子TGF-β、IL-10的含量,阻断炎症反应,缩短炎症持续时间。4、益生菌可以缓解结肠炎大鼠肠道菌群失调情况,提高双歧杆菌、拟杆菌等益生菌的比例。5、益生菌可以减少结肠炎大鼠肠毒素基因携带率。