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交沙霉素(josamycin)是属于十六元大环内酯类抗生药物,它是一种广谱抗菌素,其抗菌谱与红霉素相似,但是副作用较小且不易使病菌产生抗药性。本课题的主要内容是研究交沙霉素的分离提取和纯化工艺。主要取得了一下成果:首先,建立了关于交沙霉素的分析检测方法,包括生物测定法和高效液相色谱法。其中高效液相色谱法具有快速、准确等特点,适用于测定发酵液及各个分离环节中的含量。通过改变流动相的比例,缓冲液的浓度和酸碱度,经过优化后的色谱条件是:色谱柱用碳十八烷基硅胶键合柱;流动相是甲醇和磷酸缓冲液,其比例是80:20;检测波长是232nm;流速是1ml/min;进样量是10ul;柱温是室温。在上述条件下交沙霉素的保留时间为6.412min,与其他杂质峰的分离度大于1.5。在大孔树脂吸附分离法的研究中,从几种常用的大孔树脂中筛选出了XAD-16树脂为吸附剂,优化后的吸附条件为:吸附流速为0.5ml/min;pH为10;加入1%的氯化钠的盐浓度。解吸的时用乙醇为解吸剂,优化后的洗脱条件:70%和100%两种浓度的乙醇为洗脱剂,采用梯度洗脱的方式,先用70%的乙醇洗脱,大量的杂质及色素被洗脱;然后用100%的乙醇将有效成分洗脱下来。在溶媒萃取法提取的试验中,由于交沙霉素在发酵液中大部分存在于菌丝体中,所以试验中将发酵液调pH值到9,然后离心分离,将菌丝体与轻质碳酸钙粉末以质量比为1:1的比例混合均匀,在真空干燥箱中50℃条件下干燥6小时。将干燥的菌丝体均匀粉碎大小颗粒为20目。干燥菌丝体颗粒用95%浸提乙醇,通过设计正交试验得到用95%乙醇浸提干燥菌丝体颗粒的最优条件是:每10克干燥菌丝体用20毫升95%乙醇;浸提时间为36小时;浸提温度为室温;浸提次数为3次。在交沙霉素的精制阶段,用200-300目的层析硅胶装柱,用氯仿:甲醇=2:3比例配制的洗脱液进行洗脱,收集洗脱液后在旋转蒸发器中浓缩(真空度为0.095Mpa,温度为50℃)。浓缩液挥干后得到黄色粉末状的交沙霉素,然后用pH3.5的酸化水溶解该粉末。将交沙霉素的酸化水溶液调pH到9后,静止20-30分钟,便有淡黄色的交沙霉素晶体析出。通过对交沙霉素晶体的室内生物活性测定,所得晶体的活性略小于购买标准品。的活性。