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我国多年来一直在开展杨树抗溃疡病育种工作,但是在实际生产中仍然无法有效地控制杨树溃疡病的大面积发生和危害。所以积极开展杨树溃疡病抗性分子机理,尤其是开展与抗性相关的类甜蛋白的研究,将为培育杨树抗溃疡病品种,有效控制杨树溃疡病发生、流行奠定理论和应用基础。本实验以溃疡病菌侵染过程中不同时期的毛果杨成熟叶、根和枝干树皮为研究材料,应用荧光实时定量PCR技术,分析溃疡病菌侵染过程中11个候选内参基因在杨树中的表达稳定性,筛选出溃疡病菌侵染过程中杨树基因表达检测的最佳内参基因。应用选出的最佳内参基因为标准检测病菌侵染过程中,类甜蛋白基因家族中各基因在不同器官、不同发病时期的表达特征,分析类甜蛋白基因家族中各基因与溃疡病菌侵染的相关性,并初步确定与杨树溃疡病抗性相关的特定类甜蛋白基因。同时分析TLPs基因上游序列中顺式作用元件的种类和分布特征,并探讨顺式作用元件与杨树溃疡病抗性之间的相关性。主要实验结果如下:1.溃疡病菌侵染过程中,11个常用管家基因(UBQ、UBQ-L、ACT2、EF1α、ACT11、5.8s rRNA、CYP、EF1β、EIF4B-L、TUA、TUB)在杨树树皮中表达稳定性较高的5个管家基因依次为UBQ-L、CYP、EF1β、TUB和5.8s rRNA。UBQ-L、CYP表达最为稳定,而ACT11、EF1α基因的表达稳定性最低。2.树皮中表达相对稳定的5个管家基因UBQ-L、CYP、EF1β、TUB和5.8s rRNA在杨树叶部、根部以及树皮三个部位的表达稳定性检测结果显示,UBQ-L为树皮和根部中最佳的内参基因,EF1β为叶部的最佳内参基因。3.基因表达配对差异值V2/3为0.101,小于0. 15,表明该实验条件下设定两个内参基因可以达到准确定量的标准。4.溃疡病菌侵染过程中,TLPs基因在毛果杨叶部、树皮和根部均有表达。胁迫诱导后,叶部和根部表达迅速提高,根部稍晚。5.溃疡病菌侵染后TLPs基因表达模式分为三个不同类型。分别为:类型Ⅰ:溃疡病菌侵染后,TLPs基因的表达量迅速上升;类型Ⅱ:溃疡病菌侵染后,TLPs基因的表达量先微量下调,然后不断上调;类型Ⅲ:溃疡病菌侵染后,TLPs基因的表达量持续下调。叶部和树皮中TLPs呈现以上三种类型,而根部TLPs只呈现类型Ⅰ和类型Ⅱ两种表达类型。6.同一个TLPs基因在毛果杨不同部位的表达模式并不相同。7.推测P01、P02、P23、P31、P38、P42、P45和P47八个TLPs与杨树病害胁迫反应密切相关。8.发现杨树TLPs基因上游调控序列中存在13类26种与胁迫相关的专一性应答元件,分别为脱落酸ABRE,厌氧诱导ARE,光反应AT1 motif、box 4、box I、GT1-motif、I-box、MRE、G-Box、box II、G-box、GATA-box和TCT motif,真菌诱导Box-W1,乙烯ERE,赤霉素GARE和P-box,热胁迫HSE,低温LTR,干旱MBS,防卫TC rich ,水杨酸TCA-element ,茉莉酸甲酯TGACG-motif和CGTCA-motif ,生长素TGA-element和GC-motif。9. ABRE、ARE、Box-W1、ERE、GARE、P-box、HSE、LTR、MBS、TC rich和CGTCA-motif与抗性密切相关,防卫应答元件TC rich的分布最广泛。13种TLPs基因上游调控序列中存在真菌诱导应答元件Box-W1,其中P01、P07、P10、P13、P26、P31六种在毛果杨叶部、根部和树皮中均迅速大量表达,与抑制溃疡病菌的侵染密切相关。