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目的:在特异性T细胞的活化过程中,共刺激分子B7家族提供正、负双重信号。B7-H1和B7-H4是新发现的B7家族成员,在调控T细胞免疫反应中发挥重要作用。目前,关于B7-H1和B7-H4在结肠直肠癌上的表达及其在肿瘤发生、发展中作用的报道非常少。本研究将明确B7-H1和B7-H4在人结肠直肠癌组织中的表达情况,并探讨其在结肠直肠癌发生、发展中的作用,为寻找肿瘤新的诊断标志和免疫治疗靶点提供理论依据。虽然有充分的证据表明B7-H1分子的共刺激功能不是通过PD-1受体介导的,但至今B7-H1共刺激受体仍未明确鉴定出来。本实验将致力于B7-H1第二受体的寻找。方法:运用免疫组织化学方法检测60例结肠直肠癌标本中B7-H1和B7-H4的表达情况,并分析其表达与各临床病理参数之间的关系。构建T7噬菌体展示人T细胞cDNA文库,以B7-H1Ig融合蛋白为靶蛋白,筛选与其有结合关系的多肽或蛋白。结果:1.B7-H1和B7-H4在结肠直肠癌标本中均呈阳性表达,在细胞膜、细胞浆内或二者同时表达,而正常结肠直肠组织不表达或低表达。2.在60例结肠直肠癌组织中,60%的标本B7-H1阳性表达,并且显著高于正常结肠直肠上皮组织(P<0.01)。B7-H1分子表达水平与肿瘤患者性别、年龄、组织类型、肿瘤分级和分期均无相关性(P>0.05),但与有无淋巴结转移显著相关(P<0.01)。3.在60例结肠直肠癌组织中,B7-H4的表达率高达83.3%。B7-H4的表达水平与淋巴结是否转移显著相关(P<0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤组织类型、分级和分期均无关(P>0.05)。4.经测定,构建的T7噬菌体展示cDNA原始文库的效价为2×107 pfu/ml,扩增后文库的效价为4×1010 pfu/ml。随机挑取100个噬菌斑进行PCR鉴定,文库重组率为92%,插入片段大小为300～2000bp,符合文库的构建要求。5.以B7-H1Ig融合蛋白为靶蛋白筛选人T细胞T7噬菌体展示cDNA文库,目前仍未获得与B7-H1Ig有结合关系的蛋白或多肽。结论:1. B7-H1和B7-H4高表达于结肠直肠癌中,不依赖患者的性别、年龄、肿瘤组织类型、分级和分期,仅与有无淋巴结转移相关。2.B7-H1和B7-H4在结肠直肠癌组织中的过度表达,在肿瘤的发生、发展中发挥一定作用,参与结肠直肠癌细胞的免疫逃逸。3. B7-H1和B7-H4在正常结肠直肠组织中低表达,而在结肠直肠癌组织中高度表达,有望成为结肠直肠癌新的诊断标志和免疫治疗新靶点。4.成功构建了人外周血T细胞T7噬菌体展示cDNA文库,为寻找B7-H1的第二受体打下基础。