大量研究认为中医经络的物质基础为结缔组织,课题组的前期研究发现活性氧与经络密切相关,而成纤维细胞是与结缔组织功能密切相关的细胞组分。故本文从成纤维细胞出发,通过对其与活性氧、胞外基质中的Ⅰ型胶原蛋白以及结缔组织中另一重要细胞组分——肥大细胞之间相互关系的初步研究,探索研究经络的相关作用机制。实验主要分为体内实验和体外实验两部分,具体内容如下:(1)体内实验:选取大鼠腹白线(解剖学上与任脉重合的结缔组织)为主要研究对象,对比其他组织的活性氧相关生化指标,分析腹白线的活性氧水平;对大鼠进行尾静脉注射过氧化氢、谷胱甘肽或生理盐水,通过WestemBlot分析不同活性氧水平对ERK信号通路的影响。(2)体外实验:选择构建体外活性氧引发体系,并确定其主要作用部位是在胞内或胞外;通过单独培养与共培养的细胞体系,探究成纤维细胞(L929)与活性氧、Ⅰ型胶原蛋白和肥大细胞(P815)之间的相互作用,以及经络中含量较高的钙离子对单独培养和共培养体系中胞内活性氧浓度及细胞存活情况的影响。实验结果如下:(1)体内实验:确认腹白线中活性氧浓度相对较高,其中的细胞处于较高的氧化胁迫强度的环境中;而活性氧过氧化氢、抗氧化剂还原型谷胱甘肽分别对结缔组织ERK信号通路产生极显著的下调、上调作用。(2)体外实验:L929细胞的存活率在活性氧浓度较低时相对稳定。Ⅰ型胶原蛋白促进结缔组织成纤维细胞L929的增殖,且在其遭受胞外活性氧攻击时有一定的保护作用;肥大细胞P815促进L929细胞分泌Ⅰ型胶原蛋白且能改变其细胞形态;胞外活性氧对!型胶原蛋白以破坏作用为主,而胞内活性氧会促进L929细胞分泌!型胶原蛋白;活性氧对L929细胞形态的改变在一定程度上是可逆的;培养基中的钙离子会影响胞内活性氧水平,较低浓度的钙离子内流对细胞的增殖有益,且因其能影响肥大细胞脱颗粒,故还能通过此作用间接影响L929细胞。结论:本文确认经络任脉重合的腹白线上活性氧浓度较高,活性氧对成纤维细胞分泌的!型胶原蛋白具有调控作用,!型胶原蛋白与肥大细胞的共培养有助于维持较高活性氧状态下成纤维细胞的形态与功能,从而保证经络物质基础的稳定;钙离子对成纤维细胞迅速且显著的作用可能是针灸效应的一种内在机制。