论文部分内容阅读
microRNA(miRNA)是一类内源性的非编码单链小分子RNA,约18~25个碱基,它通过与目标信使RNA结合来调控基因的表达,据推测,miRNA调节着人类约60%的基因表达,并且miRNA的表达水平与人类某些重大疾病如癌症密切相关。因此miRNA的定量检测和表达分析对深入研究其生物功能、临床诊断与治疗以及相关基因药物的开发等具有重大意义。 环诱导等温放大反应能够通过一步操作实现miRNA的灵敏检测,但是该方法的一个缺点是必须使用一条很长的DNA模版,而且需要利用三条不同的引物(FIP,BIP和B3)发生多次反应来生成该反应的起始结构——一条两端成环状的哑铃型结构的DNA模板,该DNA模板引发了自动循环的链取代DNA的合成,最终产生DNA指数扩增。在本文中,我们直接设计了一条双环哑铃型结构的DNA模板,其3′端悬着一段与miRNA互补的序列,该方法仅用一条引物(BIP),以miRNA引发等温放大反应,只需一步反应就能产生这条双环哑铃型结构的DNA模板。利用该等温放大反应能检测低至10amol的miRNA,线性范围跨越5个数量级,能区分miRNA间的单碱基差异。该方法只使用一种酶,无需荧光标记的DNA探针,利用普通的SYBRGreen?荧光染料,一小时内即可完成miRNA的检测,因此,该方法在microRNA分析中具有很好的应用前景。