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研究背景:一些基因在正常组织中仅表达于睾丸和/或卵巢的生殖细胞中,而在各种肿瘤组织中却被异常激活,这类基因被统称为癌-睾丸基因(cancer-testis genes)或癌-生殖系基因(cancer-germline genes)。DAZL是一个生殖细胞中特异表达的基因,其蛋白通过与mRNA结合促进mRNA的翻译。许多研究表明DAZL基因在精子和卵子的发育过程中起到重要作用,但其在癌症中的作用尚无报道。方法:利用免疫组化方法检测DAZL和RRM2蛋白在肺癌组织芯片中的表达;利用慢病毒表达系统构建了过表达DAZL和干扰DAZL的稳定细胞系;利用腺病毒表达系统干扰RRM2基因的表达;采用MTT实验、克隆形成实验、EDU细胞增殖实验、流式细胞分析等分析了DAZL基因对肺癌细胞增殖的影响。结果:1)在正常肺组织中没有检测到DAZL蛋白的表达;而在肺癌组织中,DAZL的表达随肿瘤级别的升高而增多。2)干扰DAZL基因可以抑制肺癌细胞的活力、克隆形成和DNA合成,促使细胞分裂停留在S期。并且,干扰DAZL基因可以显著提高肺癌细胞对吉西他滨的敏感性。相反,过表达DAZL基因则促进细胞的活力、克隆形成和DNA合成,导致肺癌细胞对吉西他滨的敏感性降低。3)通过生物信息学分析发现RRM2的3′UTR区域中含有DAZ L蛋白的结合位点。荧光素酶分析和Western blotting结果表明,DA ZL蛋白促进RRM2的翻译,而RNA结合活性失活的突变体(R135G)则不能促进RRM2的翻译。免疫组化分析的结果表明DAZL与R RM2在肺癌组织中表达有显著正相关(Pearson相关系数=0.388、p值<0.001)。4)根据以上结果,我们猜想DAZL可能通过调控RRM2的表达从而影响细胞的增殖和吉西他滨敏感性。为了验证我们的猜想,我们进行了rescue实验,在DAZL过表达细胞系中用RRM2干扰腺病毒抑制细胞内RRM2蛋白的表达,结果表明:在过表达DAZL的细胞中,干扰RRM2基因可以显著抑制细胞增殖、增加细胞对吉西他滨的敏感性。结论:1)DAZL是一个新的癌-睾丸抗原基因;2)DAZL通过促进RRM2的翻译,从而促进肺癌细胞增殖、降低肺癌细胞对吉西他滨的敏感性。