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红霉素(Erythromycin,ERM)系十四元环大环内酯类抗生素(分子式C37H67NO13),是由红霉素链霉菌的培养液中提取出来的。在兽医临床上具有广泛的应用价值,主要用于对青霉素耐药的金黄色葡萄球菌所致的轻、中度感染和对青霉素过敏的病例,如子宫内膜炎、乳腺炎和猪丹毒等。对禽的慢性呼吸道病、鸡传染性鼻炎、猪支原体性肺炎也有较好的疗效。在动物饲养过程中及兽医临床上不正确地使用兽药,不遵守休药期规定等原因均可导致动物体内红霉素的残留。本研究旨在建立LC-MS/MS测定牛、羊可食性组织中红霉素残留的测定方法,以便为检测牛、羊可食性组织中红霉素的残留提供依据。研究内容:1.建立LC-MS/MS检测牛、羊可食性组织中红霉素残留的方法。对比选择了牛、羊的肌肉、肝脏、肾脏、肺脏、肠及牛奶和羊奶最佳的前处理方法。最终组织样品采用乙腈提取,正己烷重复除脂,低温离心的前处理方法,奶制品采用QuEChERS的前处理方法。采用CAPCELL PAK(4.6mm×150 mm,5μm)色谱柱,30℃柱温,进样量5μL,乙腈:氨水(V/V=92:8),组织样品0.5 mL/min的流速,奶制品0.8 mL/min的流速均为等度洗脱。电喷雾离子源(ESI),正离子扫描下的多反应监测模式。2.试验中根据药物极性和样本性质,提取剂分别选用了乙腈、氯仿和甲酸三种;对提取剂乙腈和除脂剂正己烷不同体积的选取;流动相根据红霉素、罗红霉素及质谱的特点选用甲酸铵,乙酸铵,氨水三种盐溶液;对比了 1.5%,0.5%和0.2%三种不同浓度的氨水;对比了 Supersil ODS-B和CAPCELL PAK MG Ⅱ-C18、Poroshell 120EC-C18 三款色谱柱;对比了 2℃、25℃、30℃、35℃及40℃5种不同的柱温;对比了等度洗脱和梯度洗脱2种洗脱条件。研究结果表明:最佳的提取剂为乙腈20mL,除脂剂为正己烷20mL,流动相选择乙腈-0.5%氨水(92:8),色谱柱为CAPCELLPAK MGⅡ-C18,柱温为30℃,组织样品0.5mL/min的流速、奶制品0.8mL/min的流速等度洗脱。红霉素在5ng/mL～200ng/mL范围内线性关系良好,R2达0.99。该方法检出限为5 μg/kg,定量限为20 μg/kg,相对回收率为77%～120%,精密度良好(日内及日间相对标准偏差均小于10%)。牛、羊可食用组织样品在4℃、室温及-20℃保存一周的RSD均小于10%,其稳定性均良好。专属性考察结果显示,组织样品中红霉素和罗红霉素(内标物)的保留时间分别为5.967min,8.548min;奶制品的保留时间分别为3.608min,4.946min。峰形良好,色谱峰之间无干扰。结论:运用本方法测定牛、羊可食性组织中红霉素残留的结果均符合农业部235号公告中对牛、羊及其奶中红霉素的最高残留限量规定的要求,该方法操作简便,准确度高,稳定性好,专属性强,经实验室间验证后有望认证为标准检测方法。