【摘 要】
:
目的:在经过对大样本人群高通量测序研究发现了ARHGEF17基因是人颅内动脉瘤发病风险基因的基础上,拟通过动物实验及细胞实验研究进一步证明ARHGEF17基因异常是推动颅内动脉瘤形成以及破裂出血的一种内在关键因素,探究ARHGEF17基因缺陷导致颅内动脉瘤发生和发展的内在机制,为该疾病的精准治疗和临床预防提供潜在靶点,奠定理论基础。内容与方法:一:探索构建小鼠颅内动脉瘤模型,使用不同剂量的诱导药物
论文部分内容阅读
目的:在经过对大样本人群高通量测序研究发现了ARHGEF17基因是人颅内动脉瘤发病风险基因的基础上,拟通过动物实验及细胞实验研究进一步证明ARHGEF17基因异常是推动颅内动脉瘤形成以及破裂出血的一种内在关键因素,探究ARHGEF17基因缺陷导致颅内动脉瘤发生和发展的内在机制,为该疾病的精准治疗和临床预防提供潜在靶点,奠定理论基础。内容与方法:一:探索构建小鼠颅内动脉瘤模型,使用不同剂量的诱导药物搭配,比较动物模型诱导成功率,对比破裂出血率,确定适合用于后续实验的合理药物剂量,指导后续实验研究。二:使用CRISPR-Cas9技术制作基因敲除小鼠,观察Arhgef17基因缺陷是否导致小鼠生存和发育障碍。经繁育和鉴定后获得足够数量的纯合品系Arhgef17-/-基因敲除小鼠,用于后续实验。获取动物组织样本,通过组织病理染色与电镜成像观察Arhgef17-/-小鼠是否存在血管结构异常。三:探究ARHGEF17基因缺陷在颅内动脉瘤发病中的作用。使用Arhgef17-/-小鼠制作颅内动脉瘤动物模型,设置对照组,比较动脉瘤诱导成瘤率、破裂出血率,并进行生存分析。观察Arhgef17-/-小鼠脑血管壁损伤情况,使用组织病理染色、免疫荧光染色、TUNEL标记法观察Arhgef17基因敲除是否加剧了血管壁损伤,包括血管壁弹性纤维和胶原破坏降解、血管炎症加重以及壁细胞损伤凋亡。四:细胞实验探究ARHGEF17异常对内皮细胞生存、功能的影响,探究ARHGEF17介导的Rho-ROCK分子通路在细胞功能紊乱和内皮损伤中的作用机制。五:基于ARHGEF17-Rho-ROCK分子通路失调导致内皮损伤,从而促进颅内动脉瘤发生进展机制的靶向治疗动物实验:在Arhgef17-/-小鼠动物模型体内水平使用ROCK分子抑制剂,观察分子抑制靶向治疗对动脉瘤形成/破裂出血是否存在阻断和治疗效果。结果:一:使用不同剂量药物配伍制作疾病模型,小鼠模型中颅内动脉瘤的发生率与两种药物所用剂量成正相关,随着血管紧张素或弹性蛋白酶使用量的增高,动脉瘤发生率也随之增加,动脉瘤破裂出血的风险和概率也随之增加。据此,可选择适用于后续研究的合理给药剂量。二:Arhgef17基因敲除未导致小鼠明显发育障碍和致死现象。经繁育和鉴定后获得了纯合品系Arhgef17-/-基因敲除小鼠,组织切片染色与电镜观察后发现Arhgef17-/-小鼠存在血管异常,管壁结构较薄弱。三:与对照组相比,Arhgef17-/-基因敲除小鼠颅内动脉瘤发生率呈增高趋势,但差异不够显著;动脉瘤破裂发生率则显著增高。生存分析表明基因缺陷小鼠模型生存率明显降低。Arhgef17-/-小鼠脑血管壁胶原和弹性纤维断裂、破坏情况更严重、降解明显;管壁炎性细胞浸润增加、血管炎症加剧,且血管壁细胞损伤凋亡加重。四:敲减ARHGEF17的内皮细胞生存增殖力减弱、凋亡增加、形变迁徙能力受损;ARHGEF17异常使得内皮结构形态变化进而导致内皮细胞间连接受到损伤,可能引起内皮渗透性改变。Western blot检测Rho A、Rho B蛋白总量无显著改变,而Pull down实验观察到ARHGEF17敲降后Rho A-GTP活性蛋白降低、Rho B-GTP活性蛋白增加;且Rho激酶(ROCK)的效应分子MYPT1磷酸化比率增高,提示Rho/ROCK通路激活程度增加。同时发现反向抑制ROCK活性逆转了敲减ARHGEF17导致的内皮细胞功能紊乱和损伤,证实了ARHGEF17-Rho-ROCK分子通路是调控内皮细胞相关功能的分子通道。五:与对照组相比,Arhgef17-/-小鼠使用ROCK分子抑制剂后,动脉瘤破裂出血率降低,存在一定治疗效果,生存分析提示干预治疗组生存率显著提升。结论:1.ARHGEF17基因异常与颅内动脉瘤发病具有直接相关性;2.动物实验证实ARHGEF17基因缺陷可导致血管异常和病变损伤加重,加剧了颅内动脉瘤发病及破裂出血;3.实验结果表明ARHGEF17异常导致血管病变发展的内在分子机制是其介导调控的Rho-ROCK通路异常,进而导致了其参与维持的内皮功能和血管稳态失常,此发现为颅内动脉瘤精准治疗提供了潜在靶点和理论基础。
其他文献
目的:本研究试图对ADAMTS基因与家族性颅内动脉瘤(familial Intracranial aneurysm,FIA)和散发性颅内动脉瘤(sporadic Intracranial aneurysm,SIA)相关关系进行研究。为了解IA的分子机制提供新的认识,为预测和干预颅内动脉瘤的形成和破裂提供新的手段。研究内容:1、对前期家族性颅内动脉瘤的下一代测序(全基因组和全外显子测序)结果进行生物
目的分析累积饮酒对新发脑卒中、2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)及空腹血糖受损(impaired fasting glucose,IFG)、全因死亡的影响。方法本研究是依托开滦研究进行的一项基于社区人群的前瞻性队列研究。观察对象为开滦集团在职及离退休职工。自2006年起每2年对上述人群进行一次健康体检,收集流行病学资料、人体测量指标和实验室检查数据。根据研究目
研究背景和目的:缺血性卒中目前任然是全球各国面临的重大医学课题,是人类致死和致残的首要原因,尤其是在老年人群当中更为显著。经过临床观察,我们可以发现,缺血性卒中发生后除了出现相应神经功能障碍以外,部分患者在原发脑部损伤后会序贯性的出现心功能的异常,无论患者是否存在心功能异常的既往史,越来越多的证据表明,人体确实存在一个“脑-心”轴,而老年人群也更容易发生缺血性卒中后的心功能异常并发症。D-4F是一
作为一种语文教学的组织形式,整本书阅读能够将培养学生语文学科核心素养,真正落实在实际教育中,通过对整本书的内容进行整合,促使语文教学改革能够更加深入。因此,在初中的语文教学中,需要对影响整本书阅读落实的具体因素进行分析,制定出具备一定可行性的完善策略。以此保证能够探索出具备一定可行性的教学策略,为提升教学效率、培养学生核心素养提供一定支持。本文将以《水浒传》为例分析初中名著整本书阅读实践策略,希望
在线上教学期间,如何运用信息技术、交流媒介,指导学生进行主动而有创造性的整本书阅读,促进学生阅读能力、核心素养的提升,成为值得探究的问题。备课组围绕"思辨"展开《水浒传》整本书阅读指导,对该问题进行了深入研究,并得到以下可行的推进方式:(1)综合考虑线上教学的特点、名著的文本特征和初中生阅读思辨能力,合理选择名著,设置教学目标和内容;(2)循序渐进,推动学生先熟悉名著基本内容,再进行思辨讨论,并在
研究背景及目的:多发性硬化(multiple sclerosis,MS)和缺血性卒中(ischemic stroke,IS)是两种具有较高致残率的中枢神经系统疾病,严重困扰着患者个人和家庭,给社会带来巨大负担。MS和IS病因和发病机制复杂、临床表现具有多样性、已有临床治疗获益却相对有限,这些都使得它们成为了医学研究领域的热点与难点。随着两者临床潜在关联性的揭示,尤其部分MS的免疫调节药物在IS临床
背景和目的:大量的临床和实验证据表明,脑卒中可能诱发心脏功能障碍,从而增加脑卒中后的死亡率和发病率。脑卒中引起的继发性心脏功能障碍可能随年龄增长而增加。在这里,我们探索了成年小鼠缺血性脑卒中后炎症反应介导心脏功能障碍的潜在作用。脑损伤后大量的脑源性微粒(brain derived microparticles,BDMP)释放进入外周循环系统,这些脑源性微粒可以激活小胶质细胞/巨噬细胞,从而引起系统
随着语文教学改革的深入,大语文阅读观已经深入师生心中。语文教学大力提倡"海量阅读""大阅读",以丰富学生的语文阅读积累,促进学生语文阅读素养的提升。基于此,初中语文教师要深入挖掘课外阅读文本的价值,把经典之作、优秀之作推荐给学生,让学生不断汲取汉语言文学中的精华。在课外阅读推荐书目中,四大名著是必不可少的书目,它们代表中华优秀传统文化的精髓,让学生深入阅读,能够震撼他们的心灵,使其获得前所未有的语
研究目的:多发性硬化(multiple sclerosis,MS)属于中枢神经系统(central nervous system,CNS)特发性炎性脱髓鞘疾病(idiopathic inflammatory demyelinating diseases,IIDDs),是一种慢性的自身免疫性疾病,在疾病进程中,炎症反应起到核心作用,同时会造成白质(white matter,WM)损伤。局灶性脑白质脱
十三届全国人大一次会议第三次全体会议3月11日下午经投票表决,高票通过了中华人民共和国宪法修正案。此次宪法修改的主要目的,是要把党的十九大确定的重大理论观点和重大方针政策,特别是习近平新时代中国特色社会主义思想载入国家根本法,体现党和国家事业发展的新成就、新经验、新要求,在总体保持宪法的连续性、稳定性、权威性的基础上推动宪法与时俱进,完