新型荧光探针di-4-ANEPPDHQ在拟南芥质膜微区显微成像和定量检测中的应用

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植物细胞是植物体结构和功能的基本单位。细胞之间通过胞间通讯等连接方式在生长发育、逆境适应和生殖遗传等多种生命过程中实现对植物体的整体调控。其中,除了需要多种信号分子的参与,还需要多种细胞特化结构来应对特定信号产生正确效应。脂筏是植物细胞质膜中有序度较高的微小区域,又称膜微区或膜筏,在信号转导、囊泡转运、胞吞和胞吐以及病原菌入侵等生命活动中发挥重要作用,并显示出聚合、解聚、侧向位移和内吞运动等多种运动形式。因此,在植物活体细胞中对膜微区行为进行实时动态检测和追踪在植物细胞生物学研究中具有重要意义,同时也对显微成像技术提出了更高要求。精确的显微观察依赖于技术的进步和对适当方法的选择。现代活细胞内荧光探针标记作为一种高度灵敏的标记技术,与荧光显微术等成像技术相结合,为植物活体细胞动态结构的检测提供了强有力的工具。本研究选择了一种新型膜相位敏感荧光探针—di-4-ANEPPDHQ,检验了该探针对拟南芥根毛细胞的细胞毒性,优化了它在拟南芥中进行活细胞标记的实验方法,并证明了均一化极性数值(GP值)作图法在对拟南芥活细胞质膜有序度进行定量检测的可行性。这些工作为该探针在植物细胞中膜微区的可视化研究提供了坚实的实验依据。在此基础上,还进一步对质膜微区在拟南芥的根尖细胞中的分布进行了定量观测,发现质膜微区主要聚集在根毛尖端极性生长区域和根尖伸长区细胞上下极细胞膜上。这样的实验结果暗示着质膜微区的分布可能和细胞的极性生长密切相关。最后,我们还利用结构光学照明显微镜对拟南芥根毛细胞和根尖表皮细胞进行观测,直接地在植物或细胞中证实了质膜成分分布的不均一性,并在根毛细胞中首次用三维立体图像描绘了膜微区在细胞膜上的分布。
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