论文部分内容阅读
本工作研究了间型脉孢菌(Neurospora intermedia)固体发酵产纤维素酶条件及酶学性质,以CMC酶、滤纸酶活力和β-葡萄糖苷酶为主要参考指标,结果表明：以麸皮米糠为碳源且比例为1：1,硫酸铵的浓度为3%,料液比为1：1.5时为最佳产酶培养基,在初始pH值为7.0,温度为34℃,培养时间为108h的条件下纤维素酶活力较高,CMC酶活、滤纸酶活和β-葡萄糖苷酶活值大小分别为668.0U/g、162.5U/g和939.5U/g,该微生物所产β-葡萄糖苷酶反应最适温度为55-60℃,最适pH值为4.5-5.0。得到固体酶制剂对葡萄糖和蔗糖有明显的水解及异构化作用。探索了绿色木霉和间型脉孢菌混合液体发酵产纤维素酶的规律,结果表明间型脉孢菌迟于绿色木霉菌24小时接种且接种量为1：1时为最优产酶组合,此时CMC酶活值最大为96.3U/mL,高于其它产酶形式组合和单一菌株条件。对于滤纸酶混合发酵相比于两种菌的单一发酵,其酶周期延迟了1天,其产酶的高峰为第5天,此时其酶活为22.8U/mL,峰值均大于单一发酵的峰值。对槐角中的黄酮类物质进行了初步分离提取,测得所提取的产品中总黄酮和总异黄酮含量分别为61.3%和21.6%；测得槐角中槐糖(以干重计)的含量为0.52%,采用LC-MS技术初步鉴定出了山奈酚、槐角苷、染料木苷和染料木素。研究了从甜菊苷中提取与纯化槐糖。以槐糖水解得率为目的,采用正交实验优化水解条件得到槐糖最佳酸水解条件为：粗品浓度为1%,硫酸浓度为0.3N,提取时间为60min.此条件下槐糖水解得率可达34.1%。用活性炭柱层析对甜菊苷水解液进行了槐糖的分离与纯化,目标产物经LC-MS鉴定为高纯度槐糖。探索了槐糖对间型脉孢菌产纤维素酶的诱导作用。在以含槐糖(10-2M)的诱导液为碳源时,菌丝体到达酶活高峰值的诱导时间为24小时,此时CMC酶活为46.3U/mL。在脉孢菌的培养过程中,加诱导物的时间切入点影响槐糖浓度对产酶的正诱导效果；第3小时测定时,随着槐糖浓度递度升高CMC酶值几乎无变化且处在一个较低水平。第18和24小时测定时,酶活值随槐糖浓度的增大而提高,槐糖浓度为10-1M时,其酶活最大值分别为24.7U/mL和68.0U/mL。可见在只有在一定条件,脉孢菌产CMC酶的能力在条件下随着诱导槐糖浓度的提高而加强。在控索菌丝体与诱导液持续接触的时间长短对随后酶活值增长的影响时,结果表明：第6、12、18时中途洗去诱导液,它们在第24小时的酶活峰值分别为对照值的22.1%、43.4%和63.7%。