肺癌系世界上发病率及死亡率较高的恶性肿瘤之一,其中约80%为非小细胞肺癌,而肺腺癌的发病率更是日益增高。研究表明,血管生成与恶性肿瘤的生长及转移密切相关,相应血管的新生是恶性肿瘤生长和转移的先决条件,肿瘤细胞不仅由此从宿主中获得丰富的营养,而且还通过肿瘤血管转移。因此抑制肿瘤血管的新生,阻抑肿瘤生长和转移所依赖的血管生成已成为当前抗肿瘤尤其是耐药肿瘤治疗的重要策略。近年来血管生成抑制剂的研究倍受肿瘤学家的重视,国外已有至少35种血管生成抑制剂进入临床研究阶段。但目前国内的血管生成和抗血管生成研究还远不深入。姜黄是我国的传统中药,属姜黄属植物,研究发现,其主要活性成分姜黄色素可影响肿瘤发生、发展的各个阶段(始发、促进和演进),作为一种具有良好发展前景的抗癌药物,姜黄色素在肿瘤预防和治疗方面的作用已引起了国内外学者的广泛关注,成为研究的热点。研究表明,姜黄色素可能通过癌化学预防作用、抗肿瘤细胞增殖作用、诱导肿瘤细胞凋亡作用以及抑制血管生成作用等方式发挥其抗肿瘤活性。姜黄色素主要含有三种主要成分:姜黄素Ⅰ(77%);姜黄素Ⅱ,即脱甲氧基姜黄素(17%);姜黄素Ⅲ,即双脱甲氧基姜黄素(3%)。有研究报道姜黄素Ⅲ的抗肿瘤活性最强,其次为姜黄素Ⅱ及姜黄素Ⅰ。由于姜黄素Ⅲ含量较少,不易分离及提纯,因而目前对姜黄色素的研究绝大多数是以姜黄色素的混合物或姜黄素Ⅰ为对象。目前尚未发现有关姜黄素Ⅲ抗肿瘤血管生成作用体内实验方面的研究报道。本课题采用自行分离、提纯的姜黄素Ⅲ,主要研究姜黄素Ⅲ体内抑制人肺腺癌细胞系A549裸鼠移植瘤生长及其抗肿瘤血管生成作用,并初步探讨其作用机制,为进一步将其开发成为具有临床应用价值的血管生成抑制剂提供一定的理论和实验依据;同时观察姜黄素Ⅲ与传统化疗药顺铂联用对抑制裸鼠移植瘤生长有无增效作用,为临床上血管生成抑制剂与常规化疗药联用治疗肿瘤提供一定的理论和实验依据,进一步丰富肿瘤包括肺癌综合治疗的内容。方法:1.采用醇渗石油醚脱脂、硅胶G柱层析、丙酮纯化方法及途径从中药姜黄中提取姜黄素Ⅲ单体,并采用高效液相色谱法测定其纯度; <WP=8>2.培养人肺腺癌细胞系A549,建立裸鼠移植瘤模型;3.将成瘤裸鼠随机分成5组:阴性对照组、TNP-470组、姜黄素Ⅲ组、顺铂组、姜黄素Ⅲ+顺铂组,观察姜黄素Ⅲ及其与顺铂联用对人肺腺癌裸鼠移植瘤生长的影响;4.采用组织学技术,观察移植瘤结构;5.采用免疫组织化学技术,观察各实验组移植瘤CD34、VEGF、VEGFR-1、VEGFR-2的表达情况;采用ELISA法检测各实验组血清中VEGF的含量。结果: 1.成功从姜黄中分离出姜黄素Ⅲ,纯化后经高效液相色谱法测定其纯度达95.2%;2.姜黄素Ⅲ组人肺腺癌细胞系A549裸鼠移植瘤瘤重及体积分别为0.57±0.10g和699.40±118.03mm3,显著低于阴性对照组(1.15±0.18g及1413.4±266.33mm3,p<0.01);3.姜黄素Ⅲ组MVD为40.13±7.05,显著低于阴性对照组(76.67±10.48,p<0.01),但与TNP-470组相比无显著差异(37.53±6.80,p>0.05);4.免疫组化结果显示,姜黄素Ⅲ组VEGF及其受体VEGFR-1、VEGFR-2表达的阳性组织RGV值分别为1.63±0.13、1.47±0.12、1.48±0.15,显著低于阴性对照组(分别为2.49±0.15、1.78±0.12、2.27±0.18,p<0.01);同时,ELISA检测结果显示,姜黄素Ⅲ组血清中VEGF含量为65.18±11.62 pg/ml,显著低于阴性对照组(100.52±13.17 pg/ml,p<0.01);5.顺铂组对人肺腺癌细胞系A549裸鼠移植瘤MVD、VEGF及其受体VEGFR-1、VEGFR-2的表达无明显影响;6.姜黄素Ⅲ和顺铂联合治疗组人肺腺癌细胞系A549裸鼠移植瘤体积及瘤重分别为0.24±0.05g、354.72±123.72 mm3 ,均显著低于姜黄素Ⅲ及顺铂单药治疗组(p<0.01),q值为1.00。结论:1.采用醇渗石油醚脱脂、硅胶G柱层析、丙酮纯化方法及途径提取姜黄素Ⅲ单体效果较好,且操作简单;2.姜黄素Ⅲ能明显抑制人肺腺癌细胞系A549裸鼠移植瘤的生长; 3.姜黄素Ⅲ具有确切的抗人肺腺癌细胞系A549裸鼠移植瘤血管生成作用,其机制可能与其抑制移植瘤中肿瘤细胞和/或内皮细胞VEGF及其受体VEGFR-1、VEGFR-2的表达有关; <WP=9>4.姜黄素Ⅲ与顺铂联合应用对抑制人肺腺癌细胞系A549裸鼠移植瘤的生长具有相加作用。