前言 P63是P53家族的新成员，二者结构虽然相似，但生物学功能上却有一定的差异。P63基因可编码多种产物，执行转录激活、诱导凋亡等生理功能。P53突变对膀胱癌发生、发展的作用以及其与膀胱癌预后的关系已为人们所知，但有关P63在膀胱癌中的表达情况尚未见报道。为此我们用免疫组化法检测膀胱癌中P63表达并与P53表达加以对比，旨在探讨P63与膀胱癌临床病理因素、预后及P53表达间的关系。 实验材料 一、标本选择 收集我院1995～1997初次诊断的原发膀胱移行上皮癌石蜡包埋标本46例。男性26例，女性20例。年龄40～72岁(平均52岁)。另取20例化疗后多次复发而行手术切除的标本，经组化检测证实MDR-1均强阳性，提示已发生获得性耐药。46例病人，40例获随访3年，失访或死亡者计为截尾数据。组织标本制成5μm厚连续切片5张。1张HE染色，依WHO标准进行肿瘤细胞分级；按UICC-TNM标准进行临床分期。P63、P53表达检测各一张。以不加一抗作阴性对照各1张。已知P53阳性染色膀胱癌、P63阳性染色胃癌切片作为阳性对照。 二、主要试剂 购自福州迈新生物技术有限公司。包括P53鼠抗人单克隆抗体，P63鼠抗人单克隆抗体，二者均为即用型试剂。S-P试剂盒，DAB显色剂。 实验方法 1．HE染色：所有切片均作HE染色。 2．采用免疫组织化学S-P法进行组织染色。 石蜡切片常规二甲苯脱蜡和酒精水化，高温高压抗原修复。滴加A液3％过氧化氢室温10分钟，PBS冲洗三次，每次5分钟，B液10％正常山羊血清，37℃孵育20分钟，去血清滴加一抗，37℃孵育2小时，PBS冲洗三次，每次5分钟。C液生物素标记的二抗工作液，37℃孵育30分钟。P璐冲洗三次，每次5分钟。D液链霉菌抗生物素蛋白一过氧化酶溶液，37℃孵育3O分钟。PBS冲洗三次，每次5分钟。DAB显色。苏木素复染，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。 3.对照:阳性对照选已订购的阳性对照片，阴性对照用PBS代替一抗作阴性对照。 4.判定标准:巧3、巧3均为细胞核阳性。P53阳性者，核呈黄揭色，巧3阳性者，核为褐色。每例切片在光镜下观察1仪幻个肿瘤细胞，计算染色细胞所占比例。巧3、玛3染色阳性结果:阳性细胞<10%为(+)，>5O%为(+++)，介于二者之间为(++)。 5.统计学处理:二个指标表达与临床分期、病理分级的关系采用xz检验。使用SPSS10.O版统计软件对二个指标的相关性做孙班仙皿检验分析。各指标阳性表达与肿瘤患者生存率的关系采用KaPlan一Meier分析，用助9 rank法检测结果是否有显著差异。实验结果 1.巧3、巧3表达与临床病理因素的关系:P63阳性表达率为34，8%，其中Gl 16.7%(2/12)，GZ 33.3%(5/18)，G3 56.25%(9/16);n4o%(4/10)，悦20%(3/15)，竹60%(9/15)，T40%(0/6)。P63表达各级组间差异有显著性(P<0.01)，各期间差异无显著性(P>0.05)。P53阳性表达率41 .3%，其中GI 16.7%(2/12)，GZ 33.3%(7/18)，G3 62.5%(10/16);Tl20%(2/10)，几26.7%(4/15)，竹46.7%(7/15)，T41加%(6/6)。巧3表达各期、各级间差异均有显著性(P<0.01)。 2 .P63、巧3在未化疗组与获得性耐药组表达情况:P63、巧3在获得性耐药组中的表达率，分别高于它们在各自未化疗组的表达率(P<0 .01)。 3.托3、巧3表达间相关性分析:采用S户泊n‘m相关分析发现，巧3、巧3表达间无显著相关性(”二0.48，P二0.64) 4.巧3、巧3表达与膀胧癌术后生存率的关系:40例病人术后随访3年，将P63分为高表达组(表达阳性率>50%)和低表达组(表达阳性鉴50%)，·2·两组3年生存率间差异无显著性(P>0.仍);而将巧3分为高表达组()5O%)和低表达组(<义%)，月两组间3年生存率有显著性差异(P<0.01)。讨论 1芍己是新近被克隆的巧3家族成员，它定位于3够7一29。R分蛋白有相当一部分序列与巧3相同，这些序列也参与DHA结合，转录激活等过程，但它还具有可变的氮基和淡基末端。当其过度表达时，R分蛋白能以与P53蛋白类似的方式诱导G1期细胞凋亡并激活凡1仙等巧3靶基因的转录过程。因而起初有文献认为r63可能也是抑癌基因。 很据启动子的不同，R分基因可分为以州分和△N州分两种亚型，而每种亚型依转录过程中的剪切方式不同，又可产生。、p、，等至少三种转录产物。仆栖3亚型带有酸性氮基末端，因面可激活巧3靶基因的转录过程。与此相反，△N卢3没有激活转录的功能域。 许多研究证实，R分蛋白在表皮、宫顶、前列腺等部位上皮层内的增殖性基底细胞中高度表达，但均为△N亚型。近来有文献报道，与巧3不同，在多种人类癌细胞系及肿瘤标本中，很难找到R分基因突变。但人们发现，在许多癌细胞系中，都存在r63高表达的现象，而且，转录产物以△N卢3为主。目前，人们认为，仆到分的表达可能与宫顶癌的发生、发展有关;而大量事实表明，△N解分的过表达可能鳞癌的发展密切相关。 我们的研究发现J63在磅胶移行上皮癌中的表达率为34.8%(16/46)，与膀胶癌分期无显著相关性(P>0.05)，但随其恶性程度(分级)的增