【摘 要】
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猪是研究人类疾病的理想动物模型,而Cre/loxP系统是基因打靶的主要工具,因此为了更好地研究人类各种基因功能和人类遗传疾病的发病机理、基因治疗以及药物筛选等,本研究拟构建诱导性表达Cre重组酶转基因猪动物模型,为建立条件性基因敲除猪疾病模型奠定基础。首先,通过PCR的方法获得构建表达载体所需各元件,通过三重融合PCR技术和T4 DNA重组酶连接技术体外连接构建载体所需要的所有相关调控元件,并与p
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猪是研究人类疾病的理想动物模型,而Cre/loxP系统是基因打靶的主要工具,因此为了更好地研究人类各种基因功能和人类遗传疾病的发病机理、基因治疗以及药物筛选等,本研究拟构建诱导性表达Cre重组酶转基因猪动物模型,为建立条件性基因敲除猪疾病模型奠定基础。首先,通过PCR的方法获得构建表达载体所需各元件,通过三重融合PCR技术和T4 DNA重组酶连接技术体外连接构建载体所需要的所有相关调控元件,并与pET28a载体连接构建构了诱导性表达猪源Cre重组酶的表达载体pET28a-Mx1-Cre- BGHpo1yA-FRT2neor。然后,将其线性化转染入小型猪胎儿成纤维细胞,培养并传代,经过G418抗性筛选10天后,得到诱导性表达Cre重组酶转基因猪成纤维细胞阳性克隆。最后,将阳性细胞克隆作为核供体细胞,通过核移植技术制备诱导性表达Cre重组酶的转基因猪。本研究建立的诱导性表达Cre重组酶转基因猪为更好地利用Cre/loxP系统研究人类疾病奠定了基础。
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