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目的:我国目前拥有世界上数量最多的糖尿病患者,而且我国糖尿病发病率逐年递增,现已证实患有糖尿病患者的骨折发病率要远远高于非糖尿病患者。由糖尿病所引起的骨质疏松并发症不仅给患者的生理上带来了很大的痛苦,而且给患者的经济上也带来了很大的负担。但是由于糖尿病性骨质疏松症发病机制十分复杂涉及多种因素,因此目前对于糖尿病性骨质疏松症的发病机制并不明确。铁超载与骨质疏松的关系已经得到证实,作为人体内铁离子最为主要的调控物质二价金属转运体1(DMT1)目前还没有与糖尿病性骨质疏松症的相关研究,我们认为DMT1可能是糖尿病性骨质疏松症病理机制的重要因素。成骨细胞的凋亡已经证实是骨质疏松发病的重要原因,而同样作为细胞终末调节途径的自噬在骨质疏松症中的作用一直未被研究清楚。骨质疏松症的治疗目前已经得到专家的共识,但是糖尿病性骨质疏松症由于发病机制不明所以对于其的治疗方法一直存在争议,而氧化应激反正在骨质疏松症中的作用已经被证实,因此作为人体抗氧化剂的褪黑素有可能对糖尿病性骨质疏松症具有良好的疗效。我们将通过我们的研究对糖尿病性骨质疏松症的发病机制以及治疗提出我们的假设并进行深入研究,为临床治疗糖尿病性骨质疏松症提供有力的理论依据。 研究方法:我们首先应用SD大鼠运用高脂饲料加少量链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病骨质疏松模型。应用免疫组化(IHC)和Western blotting检测DMT1的表达情况,用来观察DMT1的差异表达情况。并且应用不同剂量的褪黑素进行腹腔注射,之后应用双荧光标记法、HE染色、Masson-Goldner三色染色、Micro-CT和骨生物力学等方法对模型动物的骨从动态以及静态生物力学全面观察骨的各项指标,用以判定褪黑素的疗效。并且我们对骨组织中自噬标志蛋白应用IHC进行检测,用以判定自噬与2型糖尿病性骨质疏松症的关系。之后我们应用先天DMT1缺失的Belgrade大鼠运用高脂饲料加少量链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病骨质疏松模型,再运用HE染色、Micro-CT和骨生物力学等方法对骨的各项指标进行判定,用以确定DMT1与2型糖尿病性骨质疏松症的关系。在明确了上述现象之后,我们应用hFOB1.19细胞以高糖作为病理因素,褪黑素作为治疗手段,并且对自噬以及ERK通路进行干预,最后对自噬的标志蛋白,以及成骨过程中的各项标志蛋白进行检测,用以明确上述现象的具体调控机制。 结果:(1)与正常大鼠相比较在2型糖尿病大鼠骨组织中DMT1的表达水平要明显升高。(2) Belgrade组的骨各项指标均要明显好于normal组。(3) HMT组和LMT组均能促进骨形成,增加骨密度和骨小梁数量以及骨小梁的厚度。LMT组较HMT组改善更为明显。(4)2型糖尿病大鼠骨组织中自噬水平显著升高。而且与T2DM组相比HMT组和LMT组的自噬水平显著降低,在LMT组中最为明显。(5)高糖可以使得hFOB1.19细胞的自噬水平显著升高。(6)两个浓度的褪黑素都可以增强hFOB1.19细胞的成骨能力,而且10μM浓度的褪黑素效果更为明显。 结论:(1) DMT1在2型糖尿病性骨质疏松症的病理过程中起着重要的作用,DMT1可能是2型糖尿病性骨质疏松症的潜在治疗靶点。(2)褪黑激素可以通过抑制ERK信号通路降低成骨细胞的自噬水平并且延缓2型糖尿病性骨质疏松症的病理过程。