[研究目的]1.蒙医经典文献中没有抑郁症的记载,但根据其发病外缘及典型临床表现与症状,抑郁症与心“赫依”和“巴达干”的有着密切关系。蒙医学认为心与精神情志的关系最为密切,抑郁症的病位在于心。故而本研究蒙医学理论前提下,与抑郁症的国内外最新研究动态和趋势相结合,选择具有改善气血运行、养心安神之功效的传统蒙药肉蔻-5味丸,通过研究其对CUM大鼠的海马组织的单胺类递质、神经营养因子以及血清细胞因子的影响,阐明肉蔻-5味丸的抗抑郁作用及其可能机制。2.采用现代科技手段,结合抑郁症的发病机制的复杂性,多途径研究肉蔻-5味丸的抗抑郁作用机制,在分子生物学角度进一步证实其抗抑郁效应,为临床应用与研究提供实验依据。3.从蒙医学角度深入探讨抑郁症的病因病机,充分体现蒙医药学独特的理论及诊疗方法,为抗抑郁药物作用机制研究提供新的思路以及肉蔻-5味丸的临床应用与开发奠定基础。[研究方法]1.动物分组及给药：将SD大鼠60只适应性饲养1周后按体质量随机分为6组,每组10只。分别为正常组、模型组、阳性对照组、肉蔻-5味丸低、中、高剂量组。正常组每笼饲养5只,自由饮水摄食,不接受任何刺激。其余组单笼饲养,并接受21d的刺激。造模同时,对各组大鼠进行给药,阳性对照组给予盐酸氟西汀(3.6mg·kg-1),肉蔻-5味丸低、中、高剂量组(分别给予肉蔻-5味丸0.8g、0.4g、0.2g·kg-1),正常组和模型组给予等量生理盐水。每日1次,连续给药21d,应激结束时进行相关指标的检测。2.造模方法及评价：由慢性轻度不可预见性应激(CUMS),配合孤养的方法复制抑郁模型。应激结束时,以大鼠体重变化、Open-field行为活动检测实验、1%糖水消耗实验、Morris水迷宫学习记忆能力检测实验来进行行为学检测及评价模型。3.制备标本及检测指标：行为学观测结束后,麻醉动物,将大鼠开腹,腹主动脉取血,待凝血后3000r·min-1离心15分钟,取上清液保存待测。采血结束后将大鼠断头处死,在冰上迅速剥离大脑取海马,用液氮快速冷冻后保存待测。①采用ELISA技术检测大鼠海马5-HT、DA、NE单胺递质的含量及血清IL-1、IL-2、IL-6、IFN-a、IFN-r、TNF-a、ACTH、CORT细胞因子的含量。②采用免疫组化方法检测大鼠海马CAl和CA3区的BDNF蛋白表达。③采用RT-PCR技术检测大鼠海马组织的BDNF mRNA的表达。4.采用SPSS19.00统计软件处理,所有数据以X±s表示,选用单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。[实验结果]1.肉蔻-5味丸对CUM大鼠行为学的影响1.1对大鼠体重变化的影响：实验过程中受刺激大鼠体重变化较慢,实验第7、14、21天模型组大鼠体质量较正常组明显降低(P<0.05,P<0.01)。实验第14天肉蔻-5味丸中剂量组大鼠体质量显著高于模型组(P<0.05)；实验第21天阳性对照组和肉蔻-5味丸中、低剂量组体质量增长显著高于模型组(P<0.05,P<0.05)。结果表明,肉蔻-5味丸和西药氟西汀均能提高CUM大鼠的体重变化。1.2对大鼠1%蔗糖水消耗量的影响：与空白组比较,模型组大鼠1%蔗糖水消耗量显著降低(P<0.05)。与模型组相比,阳性对照组、肉蔻-5味丸高剂量组大鼠的1%蔗糖水消耗量显著增加(P<0.05)。结果表明,肉蔻-5味丸和西药氟西汀均提高CUMS大鼠的1%蔗糖水消耗量。1.3对大鼠Open-Field行为活动的影响：与空白组比较,模型组大鼠水平穿越格数和竖立次数显著降低(P<0.01)。与模型组相比,阳性对照组、肉蔻-5味丸高、中剂量组大鼠水平穿越格数显著增加(P<0.05,P<0.01),肉蔻-5味丸高剂量组大鼠竖立次数显著增加(P<0.01)。结果表明,肉蔻-5味丸可改善CUMS大鼠的对外界新鲜环境的好奇心降低。1.4对大鼠学习记忆能力的影响：应激结束时,与空白组比较,模型组逃避潜伏期显著增加(P<0.01)。与模型组比较,氟西汀与肉蔻-5味丸高、低剂量组大鼠逃避潜伏期均显著缩短(P<0.05,0.01),中剂量组无显著差异,但有一定的缩短趋势。与空白组比较,模型组平均穿越平台次数减少,而氟西汀与肉蔻-5味丸可不同程度增加模型大鼠平均穿越平台次数,但无显著差异。结果表明,肉蔻-5味丸和氟西汀均可提高CUM大鼠的学习记忆能力,具有一定的抗抑郁作用。2.肉蔻-5味丸对CUM大鼠血清细胞因子的影响2.1对IL-1、IL-2、IL-6的影响：与正常组比较,模型组大鼠血清TL-1、IL-2、IL-6的含量显著升高(P<0.01)。与模型组相比,阳性对照组和肉蔻-5味丸高剂量组大鼠血清IL-1的含量均显著降低(P<0.05)；肉蔻-5味丸低剂量组无显著差异,但有一定的降低趋势。2.2对IFN-a、IFN-r、TNF-a的影响：与正常组比较,模型组大鼠血清IFN-r、TNF-a的含量显著升高(P<0.01)。与模型组相比,阳性对照组和肉蔻-5味丸高剂量组大鼠血清IFN-r、TNF-的含量均显著降低(P<0,05)；肉蔻-5味丸中、低剂量组无显著差异,但有一定的降低趋势。2.3对CORT和ACTH的影响：与正常组比较,模型组大鼠血清ACTH和CORT的含量显著升高(P<0.01)。与模型组相比,阳性对照组和肉蔻-5味丸高、中剂量组大鼠血清ACTH和CORT的含量均显著降低(P<0.05,0.01)；肉蔻-5味丸低剂量组血清无显著差异,但有一定的降低趋势。3.对大鼠海马单胺类神经递质的影响：与正常组比较,模型组大鼠海马5-HT, NE,DA的含量均显著降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组相比,阳性对照组海马5-HT,NE的含量均显著增加(P<0.05),肉蔻-5味丸高剂量组海马NE的含量与中剂量组海马5-HT, DA的含量均显著增加(P<0.05)。4.对大鼠海马BDNF蛋白表达的影响：CUMS引起大鼠海马BDNF表达改变,主要表现在CA1、CA3区,其中CA3区更加突出。正常对照组大鼠海马CA1和CA3区阳性细胞排列密集,呈带状分布。模型组大鼠海马BDNF免疫反应显著减弱,与正常对照组比较差异有统计学意义。氟西汀和肉蔻-5味丸组大鼠海马BDNF表达均有不同程度的改善,其中肉蔻-5味丸中、大剂量组和西药氟西汀组大鼠海马CA3区BDNF阳性细胞排列密集,呈带状分布,阳性细胞数目百分比和IOD增加明显,与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。肉蔻-5味丸中剂量组大鼠海马CA13区BDNF阳性细胞数目百分比和IOD增加明显,与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。5.对大鼠海马BDNF mRNA表达的影响：CUMS引起大鼠海马BDNF mRNA表达改变,与正常对照组显著减弱(P<0.05)。氟西汀和肉蔻-5味丸组大鼠海马BDNF mRNA表达均有不同程度的提高(P<0.05,P<0.01),其中肉蔻-5味丸低剂量组大鼠海马BDNF mRNA表达(P<0.05)。[结论]1.本研究采用的慢性轻度不可预见性应激(CUMS),配合孤养的方法复制抑郁模型,较好地模拟抑郁症的自然病理过程及学习记忆能力障碍、单胺类神经递质降低、免疫细胞因子激活、神经营养因子缺乏等行为学和病理学改变的特征,具有较强的科学性和可靠性。2.肉蔻-5味丸能改善CUM大鼠的行为学改变,可提高Open-Field行为活动和学习记忆能力,对抑郁症具有防治作用。3.肉蔻-5味丸可提高CUM大鼠脑内5-HT、NE、DA单胺递质,其作用可能单胺类神经递质的含量有关。4.肉蔻-5味丸可不同程度抑制CUM大鼠血清IL-1、IL-2、IL-6、IFN-a、IFN-r、 TNF-a、ACTH、CORT等细胞因子激活,其作用途径可能通过免疫抑制及调控HPA轴功能来发挥抗抑郁作用。5.肉蔻-5味丸对CUM大鼠海马组织的BDNF蛋白表达及mRNA具有上调作用,对海马神经元受到损伤时具有较好的神经保护,修复和促进再生作用。此机制可能肉蔻-5味丸的抗抑郁作用机制的重要途径之一。6.传统蒙药肉蔻-5味丸与西药盐酸氟西汀胶囊对CUM大鼠的抗抑郁作用比较结果来看,肉蔻-5味丸在行为学及免疫抑制、海马神经内分泌、神经元营养保护方面作用显著,提示肉蔻-5味丸的抗抑郁作用类似于氟西汀,而且作为传统而天然药物,其毒副作用较少,具有进一步研究价值,为拓展其适应症奠定基础。