背景与目的大肠癌是人体消化道中最多见的恶性肿瘤之一,发病率在肿瘤中靠前,在所有死亡的肿瘤患者中,大肠癌的比例大约十分之一,早期发现的大肠癌手术效果极好,部分患者可以长期存活,但在现实中,因大肠癌的早期症状不明显,导致患者无法早期检查,至中晚期才有典型症状,此时检查多数已发张到中晚期,预后极差。为了减少大肠癌的死亡率,首先要做到早期发现,早期治疗,人们所做研究就是为了发现大肠癌的发病机制,发病原理,从而做到早期发现,改善患者的预后。肿瘤的形成有多种因素参与,是体内各方作用的结果,目前众多的研究提示,在肿瘤的形成过程中,表观遗传修饰发挥了很大的作用。表观遗传修饰有多种表现形式,人们发现最早的是DNA的甲基化,异常甲基化会影响到抑癌基因及促癌基因的功能,从而影响肿瘤的形成,目前的临床试验研究表明,大肠癌中有多个基因的高甲基化。CHFR(Checkpoint with FHA and Ring Finger),是seolniek和Halazoneti S于14年前通过先进的基因技术,发现的一种新基因,该基因可以控制正常细胞的分裂,并能对分裂期细胞的分裂情况做到监控,该基因因可以控制正常细胞分裂,所以具有抑制癌症的作用,有很多基因的检测点位于有丝分裂的前期,该基因是第一个被发现的。CHFR是人体中的忠诚卫士,它的基因顺列及功能非常稳定,分布在人体的各个组织。研究表明,在胃癌、乳腺癌、肝癌、白血病[7]等多种肿瘤的发生有许多的因素,而CHFR功能下降是其中重要的原始因素,目前的研究证明,CHFR功能下降与Cp G岛的甲基化有密切关系,在对胃癌、乳腺癌等肿瘤中,CHFR的研究非常多,大肠癌研究少,需要我们做更多的工作。脆性组氨基酸三联(Fragi Ie Histidine Triad,FHIT)基因是人体内众多抑癌基因之一,它的特殊之处在于它通过脆性位点影响肿瘤的发生,是人们最早发现的该类基因之一。研究发现:“在多种肿瘤的标本中,FHIT基因的启动子区出现异常高甲基化”。本实验利用PCR分别检测FHIT在癌组织及癌旁组织异常甲基化的概率,并检测CHFR在癌组织及癌旁组织异常甲基化的概率,旨在为了发现大肠癌发生的基因基础及发病机理,并从中发现FHIT和CHFR基因在大肠癌的发生中所起的作用。方法1.本实验采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)的方法检测,大肠癌组织和癌旁正常组织各46例,主要检测CHFR基因和FHIT基因启动子区的甲基化水平,并分析两基因甲基化水平与年龄、性别、肿瘤部位、分化程度、淋巴结转移、临床分期之间的关系以及CHFR基因和FHIT基因甲基化水平的相关性。2.统计学处理利用SPSS 17.0统计软件对数据进行分析,统计学方法采用χ2检验和spearman关联分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果1.CHFR基因在大肠癌组织和癌旁正常组织中的甲基化率分别为49.15%、8.69%差异有统计学意义(χ2=16.24,P<0.05);其甲基化水平与分化程度、淋巴结转移显著相关(P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤部位及临床分期无明显相关性(P>0.05)。2.FHIT基因在大肠癌组织和癌旁正常组织中的甲基化率分别为54.35%、13.04%,差异有统计学意义(χ2=22.21,P<0.05);其甲基化水平与肿瘤的分化程度、淋巴结转移呈显著相关(P<0.05),而与年龄、性别、肿瘤部位及临床分期无明显相关性(P>0.05)。3.统计学分析显示:大肠癌CHFR和FHIT基因甲基化发生率呈正相关(r=0.393,P<0.05)。结论1.大肠癌中CHFR、FHIT基因甲基化率明显高于癌旁组织,并与分化程度、淋巴结转移显著相关,表明CHFR、FHIT基因甲基化可能参与了大肠癌的发生发展和转移整个过程。2.CHFR和FHIT基因在大肠癌中的甲基化水平呈正相关,提示两基因可能在大肠癌的发生发展中起协同作用,因此联合检测CHFR和FHIT基因甲基化水平对大肠癌的诊断和预后判断有重要价值。