第一部分缺血再灌注大鼠心肌中TNF-α与fg12表达的研究目的：大量的实验已经研究了TNF-α在心肌缺血再灌注中的作用。但是TNF-α在缺血再灌注微循环障碍中的作用还不明确。我们通过检测大鼠缺血再灌注中TNF-α和fg12的表达量来明确在动物模型中fg12的表达与TNF-α是否有关。方法：建立大鼠缺血再灌注模型,将大鼠分为假手术组,缺血再灌注1天组,3天组,7天组。另外设立TNF-α中和性抗体干预组,并设立假手术组+TNF-α中和性抗体组、缺血再灌注+非免疫性抗体组作为对照。将大鼠心脏左前降支(LAD)结扎30分钟,给予1天,3天,7天不同再灌注。用Evans和TTC双染法确定心肌梗死面积。用Western blot方法检测TNF-α和fg12的表达量。TNF-α中和性抗体干预实验中,缺血再灌注前3小时腹腔内注射TNF-α中和性抗体,观察fg12的表达量。结果：缺血再灌注3天组的大鼠梗死面积明显大于1天组,和7天组。大鼠缺血再灌注后TNF-α和fg12表达升高,TNF-α和fg12蛋白在缺血再灌注3天组中表达量明显比1天组和7天组高,当TNF-α被TNF-α中和性抗体中和后,fg12蛋白表达量下降。结论：大鼠缺血再灌注后心肌组织TNF-α和fg12的表达升高,fg12的表达升高可能与TNF-α表达升高有关。第二部分促炎因子TNF-α对大鼠微血管内皮细胞fg1表达影响的研究目的：心肌缺血再灌注损伤病理生理机制复杂,促炎因子TNF-α在心肌缺血再灌注损伤中起着关键作用,并且微循环障碍在心肌缺血再灌注损伤中具有重要影响,本实验通过研究TNF-α对大鼠微血管内皮细胞龟12表达的影响来探索心肌缺血再灌注微循环障碍中微血栓形成的机制。方法：培养大鼠原代心肌微血管内皮细胞,用TNF-α不同的浓度(12.5ng/mL、25ng/mL、50ng/ml)刺激细胞24小时,用25ng/mL的TNF-α刺激不同的时间(12小时,24小时,48小时),用实时定量PCR检测fg12mRNA表达水平,用激光共聚焦和Western blot检测fg12蛋白表达。用凝血酶生成实验检测被TNF-α刺激后大鼠心肌微血管内皮细胞的促凝活性。结果：TNF-α刺激后大鼠心肌微血管内皮细胞后,fg12mRNA和蛋白表达升高,相应地,微血管内皮细胞促凝血酶生成活性增加。激光共聚焦检测表明fg12表达在微血管内皮细胞细胞膜上。结论：TNF-α可以刺激大鼠心肌微血管内皮细胞表达fg12,并促进凝血酶的生成。这可能是大鼠缺血再灌注微循环障碍中原位微血栓形成的原因之一。第三部分TNF-α诱导大鼠心肌微血管内皮细胞fg12表达信号通路机制的研究目的：大量实验研究表明NF-κB和p38MAPK信号传导通路参与了缺血再灌注损伤,但是NF-κB和p38MAPK信号传导通路在大鼠缺血再灌注微循环障碍中的作用并不完全清楚,本实验研究探索大鼠心肌微血管内皮细胞中TNF-α诱导fg12表达信号通路机制。方法：培养大鼠原代心肌微血管内皮细胞,用NF-κB特异性抑制剂PDTC(50μmol/1)、 p38MAPK特异性抑制剂SB203580(10μmol/1)预孵育大鼠心肌微血管内皮细胞1小时,然后用TNF-α(25ng/ml)刺激大鼠心肌微血管内皮细胞24h。Western blot检测fg12蛋白表达水平。结果：预孵育PDTC (50μmol/1)1小时后,TNF-α诱导的大鼠心肌微血管内皮细胞fg12表达明显减少。预孵育SB203580(10μmol/1)1小时后,TNF-α诱导的大鼠心肌微血管内皮细胞fg12表达也明显降低。当将PDTC与SB203580合用后,fg12的表达比PDTC或SB203580单独预孵育时显著减小。结论：TNF-α可能通过NF-κB和p38MAPK信号传导通路的激活诱导了大鼠心肌微血管内皮细胞fg12的表达。从而介导了大鼠缺血再灌注微循环障碍中纤维素性微血栓的形成。