【摘 要】
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目的:从健康及牙周炎状态下的牙周膜干细胞(periodontalligamentstemcells,PDLSCs)培养上清中提取外泌体,通过体外实验观察两组外泌体对牙周炎PDLSCs增殖及成骨分化的差异,初步研究外泌体应用于牙周组织缺损再生修复的影响。方法:(1)牙周膜干细胞获取、培养及鉴定:通过酶消化法培养健康及炎症状态牙周膜干细胞(H-PDLSCs和P-PDLS
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目的:从健康及牙周炎状态下的牙周膜干细胞(periodontalligamentstemcells,PDLSCs)培养上清中提取外泌体,通过体外实验观察两组外泌体对牙周炎PDLSCs增殖及成骨分化的差异,初步研究外泌体应用于牙周组织缺损再生修复的影响。方法:(1)牙周膜干细胞获取、培养及鉴定:通过酶消化法培养健康及炎症状态牙周膜干细胞(H-PDLSCs和P-PDLSCs),对其进行常规培养传代;有限稀释法培养克隆H-PDLSCs及P-PDLSCs,并进一步对两组细胞的克隆能力进行计算;采用流式细胞术鉴定H-PDLSCs和P-PDLSCs。(2)外泌体分离及鉴定:将第三代(P3)H-PDLSCs和P-PDLSCs用去除外泌体的血清培养基(Exo-FBS)培养48h并收集两组上清,通过超速离心分离两组外泌体并进行鉴定,方法包括:①透射电镜(TEM)、②蛋白免疫印迹(WB)、③纳米颗粒追踪分析(NTA)。(3)外泌体与细胞培养:将H-PDLSCs来源外泌体(H-Exo)和P-PDLSCs来源外泌体(P-Exo)分别导入P-PDLSCs,倒置荧光检测外泌体标记情况;CCK-8及克隆形成检测外泌体对细胞增殖能力的影响;ALP及茜素红染色检测外泌体对细胞成骨能力的影响并用RT-PCR及WB进一步检测成骨相关基因及蛋白COL1、RUNX2及ALP的表达情况。结果:(1)通过酶消化法及有限稀释法培养H-PDLSCs和P-PDLSCs,细胞呈漩涡状生长,形态均为长梭形;流式细胞术结果显示两组细胞均高表达间充质干细胞表型;经克隆形成培养后两组克隆形成率分别为35.50%±1.32%及22.04%±1.45%,其差别具有统计学意义(P
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