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目的:我们前期的研究发现病毒模拟物polyI:C和致敏剂D-GalN联合注射可以诱发急性肝损伤,该损伤主要是由天然免疫细胞介导,其中Kupffer细胞和NK细胞起到重要作用。而且我们发现该损伤可以自愈。而调节性T细胞具有显著的免疫抑制作用,并且被证实在ConA诱导的急性肝炎中对限制肝脏损伤起了重要作用。所以我们推测调节性T细胞同样可以限制polyI:C/D-GalN诱导的肝脏损伤。Rag1-/-小鼠(lymphocyte-deficientrecombinaseactivatinggene-1-null)是淋巴细胞缺陷鼠,没有T、B细胞,是目前国际上研究调节性T细胞功能的常用小鼠。本文主要观察比较野生型C57BL/6小鼠、以及抗体清除调节性T细胞的C57BL/6小鼠以及过继转输调节性T细胞的Rag1-/-小鼠在polyI:C/D-GalN联合注射后诱发的爆发性肝炎模型中的肝脏损伤程度轻重以及相关炎性因子的动态变化,探讨调节性T细胞在polyI:C/D-GalN诱发的急性肝脏损伤中的免疫调节作用。 方法:建立polyI:C/D-GalN诱发的爆发性肝炎小鼠模型,于感染后12,18,24,和48小时剖杀小鼠,测定野生型C57BL/6小鼠和Rag1-/-小鼠在各个时间点血清ALT活性;肝脏石蜡切片,HE染色后观察比较野生型C57BL/6小鼠和Rag1-/-小鼠在各个时间点肝脏炎症反应的轻重;用实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法,检测比较野生型C57BL/6小鼠和Rag1-/-小鼠在各个时间点肝脏TNF-α和IFN-γmRNA水平;ELISA法检测比较野生型C57BL/6小鼠和Rag1-/-小鼠在各个时间点血清IFN-γ和TNF-α蛋白水平;进一步用抗-CD25抗体(mAb,clonePC61.5.3)清除调节性T细胞,清除鼠和野生型小鼠用polyI:C/D-GalN联合注射后,观察比较野生型小鼠和清除鼠肝脏的炎症损伤程度以及各个时间点肝脏TNF-α和IFN-γmRNA水平以及血清IFN-γ和TNF-α蛋白水平的区别;然后给Rag1-/-小鼠转输调节性T细胞之后polyI:C/D-GalN注射,检测血清ALT活性以及肝脏病理切片观察肝脏炎症损伤;结果polyI:C/D-GalN联合注射后,与野生型小鼠相比,Rag1-/-小鼠血清ALT活性在18和24小时明显增高(P<0.01),而在12和48小时两者没有明显区别(P>0.05)。肝脏HE染色结果显示,与野生型小鼠相比Rag1-/-小鼠在18和24小时有更严重的肝脏充血,炎症细胞浸润和肝细胞坏死,而在注射后12小时两者肝脏损伤无明显差别,到了注射后48小时野生型小鼠肝脏损伤基本愈合,Rag1-/-小鼠肝脏仍有轻微充血。Rag1-/-小鼠肝脏炎性因子IFN-γmRNA表达在12,18,24和48小时显著增强,明显高于WT小鼠(P<0.05)。而TNF-αmRNA水平两者无明显差别(P>0.05)。Rag1-/-小鼠血清IFN-γ和TNF-α蛋白水平在18,24和48小时显著增强,明显高于野生型小鼠(P<0.05),12小时两者无明显差别(P>0.05)。用抗-CD25抗体清除小鼠调节性T之后,FCM检测小鼠肝脏调节性T细胞的比例由18.62%下降为7.73%。清除鼠和野生型小鼠在polyI:C/D-GalN联合注射后,与野生型小鼠相比,清除鼠肝脏HE染色结果显示,18和24小时有更严重的肝脏充血,炎症细胞浸润和肝细胞坏死,到了注射后48小时野生型小鼠肝脏损伤基本愈合而清除鼠肝脏仍可见充血。清除鼠血清ALT活性在18和24小时明显高于野生型小鼠(P<0.01),在12和48小时两者血清ALT的水平未见明显差别(P>0.05)。清除鼠肝脏炎性因子IFN-γ和TNF-αmRNA表达在18,24和48小时显著增强,明显高于野生型小鼠(P<0.05),血清IFN-γ和TNF-α蛋白水平在18,24和48小时显著增强,明显高于WT小鼠(P<0.05)。同样在注射后12小时清除鼠和野生型小鼠炎性因子IFN-γ和TNF-αmRNA水平和蛋白水平均无明显差别(P>0.05)。跟过继转输CD25-细胞以及未转输细胞的Rag1-/-小鼠相比,过继转输调节性T细胞的Rag1-/-小鼠在polyI:C/D-GalN注射后血清ALT活性明显降低(P<0.05),肝脏HE染色结果也显示肝脏充血和肝细胞坏死明显减轻。 结论:在polyI:C/D-GalN诱发的爆发性肝炎模型中,与野生型小鼠相比,缺失调节性T细胞的Rag1-/-小鼠肝脏炎症损伤更重,炎性因子的表达升高。清除调节性T细胞之后,与野生型小鼠相比清除鼠的肝脏炎症损伤也加重,炎性因子的表达同样升高。而过继转输调节性T细胞之后,Rag1-/-小鼠肝脏炎症损伤减轻。实验结果表明调节性T细胞对polyI:C/D-GalN诱发的肝脏损伤有负向调节作用。