目的：　　胰岛素是治疗糖尿病的一线药物。然而，实现有效的胰岛素口服给药，需要克服其膜渗透性差、易被酶破坏降解及稳定性差等多种障碍。因此，高效的胰岛素口服传递系统应具有胃肠道稳定和促吸收的作用。无机纳米载体具有抗消化酶降解的功能，且可与蛋白类药物结合形成纳米粒。硒元素具有类胰岛素作用，也可以作为材料修饰无机纳米载体。本课题旨在以硒修饰纳米递药系统，构建一种新型的胰岛素口服递送载体，以期能提高胰岛素的胃肠道稳定性，并通过纳米载体的促吸收作用和硒的协同降糖作用进一步提高口服胰岛素的疗效。　　方法：　　1、采用静电复合-原位硒还原法制备胰岛素硒纳米粒（INS-SeNPs），选择壳聚糖与胰岛素用量比、胰岛素溶液pH值及亚硒酸钠浓度三个因素进行处方优化。使用激光粒度仪测定胰岛素硒纳米粒的粒径，透射电镜观测其形态，离心超滤法测定包封率，电感耦合等离子体法测定硒含量，圆二色谱测定胰岛素二级构象的稳定性。同时，考察INS-SeNPs在有氧介质的释药特征和在模拟胃肠液的稳定性。　　2、以正常鼠和糖尿病鼠为研究对象，灌胃给予大鼠INS-SeNPs、硒纳米粒（SeNPs）、胰岛素溶液（阴性对照组）或生理盐水（空白对照组）。此外，皮下注射大鼠胰岛素溶液作为阳性对照组。于不同时间点采集血样，采用葡萄糖氧化酶法测定大鼠血浆中葡萄糖的浓度，酶联免疫夹心法测定大鼠血浆中胰岛素浓度。同时，考察INS-SeNPs给药剂量与药效的关系。　　3、将FITC标记胰岛素硒纳米粒后，使用流式细胞仪检测不同抑制剂对Caco-2细胞摄取INS-SeNPs的影响。采用共聚焦激光扫描显微镜（CLSM）观察INS-SeNPs细胞内化现象，并与普通壳聚糖纳米粒进行比较研究。通过CLSM观察荧光标记的INS-SeNPs灌胃给药后在大鼠肠上皮上的分布和浸润情况，评价INS-SeNPs的肠上皮渗透性。　　4、采用试剂盒分析治疗前后糖尿病鼠血液中各氧化指标的变化。通过DNA断裂原位末端标记法检测治疗前后糖尿病鼠胰岛β凋亡细胞，使用显微镜观测INS-SeNPs对胰岛β细胞功能的影响。采用葡萄糖氧化酶法考察INS-SeNPs是否影响脂肪细胞对葡萄糖的利用率。　　结果：　　1、Ins-SeNPs的最佳处方为：壳聚糖与胰岛素用量比=3/1，胰岛素溶液pH=6.0，亚硒酸钠浓度=0.125mg/mL。最佳处方制备的INS-SeNPs平均粒径为120nm，ζ电位为31.8mV，透射电镜观察其形态为类球形，包封率达95.97%，载药量达23.12%，硒含量为0.045mg/mL。胰岛素的二级结构保持完好。在有氧释放介质中，INS-SeNPs12h的累计释放率约为55%。在模拟胃肠液中，被INS-SeNPs包封的胰岛素具有良好的稳定性，4h胰岛素残留量高达80%。　　2、药效实验表明INS-SeNPs具有显著的降血糖作用。INS-SeNPs的降血糖药效与给药剂量有关。与正常鼠相比，INS-SeNPs对糖尿病鼠的降糖作用更显著，持续时间更长。对于糖尿病鼠，12.5IU/kg、25IU/kg和50IU/kg给药剂量的INS-SeNPs相对口服生物利用度分别为9.15%、6.75%和4.12%。　　3、INS-SeNPs组Caco-2细胞的胞浆内和胞核内均显示强烈的绿色荧光，表明INS-SeNPs更容易内化进入细胞。网格蛋白抑制剂高渗蔗糖溶液和氯丙嗪都能明显抑制Caco-2细胞对胰岛素硒纳米粒的摄取，细胞摄取量分别下降了17.42%和38.74%。INS-SeNPs均匀分布在各肠段的上皮组织，表明胰岛素硒纳米粒有良好的跨上皮转运能力。　　4、治疗组大鼠血浆的ROS和MDA活性均有所下降，而SOD、GSH和GSH-Px活性却显著升高。与空白对照组比较，治疗组GK大鼠胰岛β细胞凋亡率显著下降（治疗前凋亡细胞率为17.6%，而治疗后则下降到2.3%）。在胰岛素硒纳米粒介导下，脂肪细胞对葡萄糖的利用明显增加，并呈现出剂量依赖性。　　结论：　　本课题成功构建了一种新型的胰岛素口服递送载体。该递送载体可以有效地提高胰岛素的包封率和胃肠道的稳定性，并发挥硒的生理活性辅助降血糖作用，从而表现出显著的降血糖效果。