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目的检测乳腺癌组织中耐药相关基因及其蛋白标志:多药耐药基因(Multidrug Resistance-1,MDR1)、乳腺癌耐药蛋白(Breast Cancer Resistance Protein,BCRP)及肺耐药蛋白(Lung Cancer Resistance Protein,LRP) mRNA及其相应蛋白/基因产物P-gp、BCRP及LRP的表达,分析它们与乳腺癌临床病理特征、化疗疗效及预后的关系,了解乳腺癌耐药的状态和可能机制,指导临床用药并为实施逆转措施提供一定的理论依据,评价其能否作为乳腺癌预后的分子生物学指标。方法(1)采用免疫组织化学方法检测2002年1月至2007年12月在宁夏医科大学附属医院手术切除的126例乳腺癌组织石蜡切片、42例癌旁组织(距癌组织≥5cm处正常乳腺组织)和30例乳腺良性病变组织中MDR1、BCRP和LRP蛋白水平的表达,探讨它们与乳腺癌临床病理特征的关系、在乳腺癌原发灶和转移灶中、复发和未复发患者乳腺组织中的表达,分析它们与化疗疗效和生存的关系及三种耐药蛋白之间的相关性;(2)采用RT-PCR方法检测2007年1月至2007年12月在宁夏医科大学附属医院手术切除的42例乳腺癌组织、42例癌旁组织(距癌组织≥5cm处正常乳腺组织)及30例乳腺良性病变组织中MDR1、BCRP和LRP基因mRNA水平的表达,分析它们在乳腺癌组织和癌旁组织及乳腺良性病变组织中的表达以及它们与临床病理特征的关系,探讨三种耐药基因表达的相互关系。结果(1)免疫组化实验部分:①P-gp、BCRP和LRP蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率分别为41.26%、38.89%和65.87%,在癌旁组织中的阳性表达率分别为14.28%、16.67%和19.05%,在癌旁组织与癌组织中的表达差异有统计学意义﹙P<0.05);P-gp、BCRP和LRP蛋白在乳腺良性病变组织中的阳性表达率分别为36.67%、33.33%和46.67%,与癌组织中的表达差异无统计学意义﹙P>0.05);②P-gp表达和TNM分期、C-erbB-2、绝经状况及腋窝淋巴结状况呈正相关;BCRP表达和ER、PR呈负相关;与C-erbB-2、绝经状况及腋窝淋巴结转移状况呈正相关;LRP表达与年龄、绝经状况、肿瘤大小、腋窝淋巴结状况、病理学类型和激素受体状况均无关;logistic多因素分析显示腋窝淋巴结状况和C-erbB-2与P-gp和BCRP相关,TNM分期和LRP相关;③Kaplan-Meier生存分析结果表明:P-gp和BCRP表达与无病生存期和总生存期均显著相关(P<0.01),表达阴性者5年生存率明显高于阳性表达者(P<0.01),LRP表达阴性者与表达阳性者的无病生存期和总生存期差别均无统计学意义;三者表达均阴性者与单一基因蛋白表达阳性者、两个基因蛋白表达阳性者、三个基因蛋白均表达阳性者之间5年无病生存期和总生存期均有显著性统计学差异(P<0.01);④三种基因蛋白表达的相关性:P-gp和BCRP表达呈正相关(P<0.05),LRP和P-gp及BCRP的表达均无相关性(P>0.05);⑤三种基因蛋白在原发灶及转移灶中的表达均无统计学差异(P>0.05);⑥根治术后5年内复发转移者和未复发转移者P-gp的表达差异有统计学意义(P<0.01),BCRP及LRP的表达在两组间差异无统计学意义(P>0.05);⑦在随访的76例患者中,伴有两个及三个耐药基因蛋白共表达的乳腺癌患者中,其无病生存期及总生存期均较单个或三者均阴性表达者明显缩短;⑧耐药基因蛋白共表达分析:耐药基因蛋白单独表达的阳性率为33.33%,两个耐药基因蛋白共表达阳性率为76.99%,三个耐药基因蛋白共表达阳性率为15.08%,两个或三个耐药基因蛋白共表达阳性率为92.07%。(2) RT-PCR实验部分:①乳腺癌组织中MDR1、BCRP和LRP mRNA水平的表达均明显高于癌旁组织,其表达差异具有统计学意义(P<0.01);②乳腺癌组织中MDR1基因mRNA水平的表达和腋窝淋巴结状况及月经状况有关;BCRP基因mRNA水平的表达和腋窝淋巴结状况及肿瘤家族史有关;LRP基因mRNA水平的表达和腋窝淋巴结状况、月经状况、年龄、ER、PR、C-erbB-2、良性病史及家族史均无关;logistic多因素分析显示,腋窝淋巴结状况和C-erbB-2与MDR1相关,腋窝淋巴结状况和BCRP相关;③三种耐药基因mRNA水平表达之间的关系:MDR1和BCRP基因mRNA水平表达呈正相关(P<0.05),LRP和MDR1及BCRP基因mRNA水平表达均无相关性(P>0.05);④三种耐药基因mRNA共表达分析:耐药基因mRNA单独表达的阳性率为23.59%,两种耐药基因mRNA共表达阳性率为54.50%,三种耐药基因mRNA共表达的阳性率为10.67%,两种或三种耐药基因mRNA共表达阳性率为65.17%。(3) RT-PCR及免疫组化方法检测结果:检测了42例乳腺癌组织中MDR1、BCRP及LRP基因及其蛋白的表达,标本中既存在三种耐药基因MDR1、BCRP及LRPmRNA的表达,也同时存在其蛋白的表达,分别为16例、14例及23例,基因及其蛋白表达密切相关(P<0.01)。结论①乳腺癌组织中既存在耐药基因MDR1、BCRP和LRP的表达,也存在耐药蛋白P-gp、BCRP和LRP的表达,三种基因及其相应蛋白表达密切相关,单基因和多基因协同作用,以多基因共表达为主,表明乳腺癌的耐药是多基因共同作用的结果。②MDR1/P-gp表达和TNM分期、C-erbB-2、绝经状况、腋窝淋巴结状况和根治术后5年内复发转移者呈正相关,并与乳腺癌的无病生存期和总生存期有关,表明MDR1/P-gp与乳腺癌的侵袭转移密切相关,可作为乳腺癌患者的预后评估指标,MDR1/P-gp阳性表达对化疗不敏感,易发生复发转移;MDR1/P-gp在乳腺癌组织中的表达与ER和PR无关,不能用来指导内分泌治疗。③BCRP表达与C-erbB-2和腋窝淋巴结状况呈正相关,与ER、PR呈负相关,与乳腺癌的无病生存期和总生存期有关,提示BCRP可作为乳腺癌患者预后不良指标,BCRP阳性表达者,内分泌治疗效果差。④LRP表达与年龄、绝经状况、肿瘤大小、腋窝淋巴结状况、病理学类型、激素受体状况、根治术后5年复发、无病生存期及总生存期均无关;表明LRP不能作为判断乳腺癌恶性程度和病情进展程度及内分泌治疗的指标。⑤P-gp、BCRP和LRP在原发灶和转移灶之间存在相同的表达,说明转移后耐药基因生物学特性未发生明显改变。