【摘 要】
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目的:眼外伤、内眼手术等原因能够引起角膜内皮失代偿,目前唯一的治疗方式是通过角膜移植恢复视力。本研究目的是探究N-（2）-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺（丙谷二肽）在小鼠角膜内皮损伤过程中能否发挥保护作用及机制,为预防角膜内皮失代偿提供新的途径。方法:通过小鼠急性高眼压前房灌注模型造成角膜内皮损伤,对照组使用乳酸钠林格氏溶液在小鼠前房持续高眼压灌注1小时,眼压为44±3.5mmHg,实验组在林格氏溶液中
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目的:眼外伤、内眼手术等原因能够引起角膜内皮失代偿,目前唯一的治疗方式是通过角膜移植恢复视力。本研究目的是探究N-（2）-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺（丙谷二肽）在小鼠角膜内皮损伤过程中能否发挥保护作用及机制,为预防角膜内皮失代偿提供新的途径。方法:通过小鼠急性高眼压前房灌注模型造成角膜内皮损伤,对照组使用乳酸钠林格氏溶液在小鼠前房持续高眼压灌注1小时,眼压为44±3.5mmHg,实验组在林格氏溶液中另外添加5mmol/L的丙谷二肽。在灌注后0d、2d和10d,通过活体角膜激光共聚焦（IVCM）观察角膜各层细胞形态变化并评估角膜内皮细胞密度;通过光学相干断层扫描系统评估各组中央角膜厚度变化;通过扫描电镜观察角膜内皮层的完整性和内皮细胞间的紧密连接;通过全角膜免疫荧光染色观察角膜内皮细胞肌动蛋白（F-actin）和Na+-Ka+-ATP酶的改变,从而评估角膜内皮屏障功能和泵功能;通过荧光探针标记线粒体检测角膜内皮细胞中线粒体的活性;进一步通过透射电镜观察角膜内皮细胞中超微结构的改变。结果:IVCM显示高眼压前房灌注造成角膜内皮细胞严重损伤,对照组内皮细胞密度下降至1807.1±463.3个/mm2,添加丙谷二肽能显著抑制角膜内皮层的损伤,两组内皮细胞密度有统计学差异（P＜0.001）;光学相干断层扫描系统显示在完成高眼压前房灌注后,两组小鼠角膜立即水肿,中央角膜厚度没有显著差异,添加丙谷二肽能显著促进角膜水肿恢复;扫描电镜结果显示在高眼压前房灌注过程中添加丙谷二肽能提高角膜内皮层的完整性,有助于维持内皮细胞间紧密连接;免疫荧光染色结果显示在灌注过程中添加丙谷二肽能预防角膜内皮细胞中细胞骨架的重组并维持Na+-Ka+-ATP酶的表达分布;线粒体荧光染色结果显示丙谷二肽能增强角膜内皮细胞中线粒体的活性;透射电镜结果显示高眼压前房灌注造成内皮细胞中线粒体结构破坏,添加丙谷二肽能改善内皮细胞中细胞器的损伤。结论:在小鼠高眼压前房灌注时,灌注液中添加丙谷二肽可以抑制急性高眼压造成的角膜内皮屏障功能和泵功能的破坏,表明丙谷二肽在角膜内皮损伤过程中能发挥保护作用,这为预防角膜内皮失代偿提供了新的途径。
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