四个群体泥鳅的遗传多样性研究

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采用线粒体控制区(D-loop)、线粒体细胞色素氧化酶亚基I(COI)和内部简单重复序列(ISSR)分析方法,对安徽怀远(HY)、河南范县(FX)、安徽舒城(SC)、安徽池州(CZ)4个群体泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)的遗传多样性、不同群体间遗传分化及亲缘关系进行研究,为品种的选育等提供理论依据。主要结果如下:1.对4个群体泥鳅的线粒体D-loop基因全序列进行测定和分析,经过比对获得918-920bp核苷酸片段。识别了泥鳅mtDNA控制区的终止序列区(ETAS)、中央保守区(CD)和保守序列区(CSB)3个区域,指出一系列保守序列(CSB-F、CSB-E、 CSB-D和CSB1、CSB2、CSB3)。序列中碱基T、C、A和G的平均含量分别为31.7%、19.9%、34.2%和14.3%, AT含量明显高于GC含量。4个群体泥鳅中共发现71个变异位点,定义了36种单倍型。其中池州群体的核苷酸多样性Pi、平均核苷酸差异数K和群体内遗传距离均最大,表明池州群体遗传多样性最丰富,而舒城群体最小。MEGA4.0软件计算4个群体间的Kimura2-paramter遗传距离,池州群体和舒城群体之间的遗传距离最大,为0.01385,而怀远群体和范县群体间的遗传距离最小,为0.00856。AMOVA分析表明,4群体间总的遗传分化系数Fst=0.3148(P>0.05),群体内分化为主要遗传分化。NJ和UPGMA系统树均表明4个群体聚为两大类,池州群体聚为一类,怀远、范县、舒城群体聚为另一类。Tajima′s D与Fu′s值中性检验表明4个群体泥鳅过去并没有群体扩张和持续增长模式,群体大小保持稳定的状态。2.对线粒体COI基因片段进行扩增测序,获得597bp的核苷酸片段,其中变异位点138个,定义30种单倍型,未观察到插入或缺失,碱基组成出现明显偏倚性,转换与颠换比为2.65,COI基因序列替换未达到饱和。池州群体具有最大的单倍型多样度、核苷酸多样性、平均核苷酸差异数和群体内遗传距离,同时池州群体与其他群体间的遗传距离、平均每位点核苷酸替代数(Dxy)和每位点净核苷酸替代数(Da)均为最大,综上,池州群体遗传变异最高,遗传多样性最丰富。群体间遗传分化系数Fst表明,池州群体与其他群体之间的遗传分化达到高度分化水平。NJ和UPGMA聚类树表明,怀远与舒城群体最先聚为一支后于范县群体相聚,最后与池州聚类,怀远、范县和舒城群体之间距离较近,池州群体与其他3个群体间的遗传距离较远。3.利用ISSR分子标记技术研究4个群体的遗传多样性和群体间的差异。筛选出的15个引物扩增得到102条带,多态性条带比例为32.35%。综合各群体所有遗传多样性指标看出,各群体遗传多样性水平为:池州>怀远>范县>舒城群体。4个群体间遗传距离在0.04022-0.08532之间,其中池州群体与其他3个群体间的遗传距离在0.07988-0.08532之间,数据显示池州群体和其他群体间的遗传距离最大。群体间总遗传分化系数(Gst)为0.364,63.6%的遗传分化发生在群体内,说明群体内的遗传分化为变异的主要来源,群体间基因交流水平(0.4368)较低,遗传漂变导致了群体遗传结构的改变。NJ和UPGMA聚类分析显示:怀远和范县群体距离最近,首先聚为一支,然后与舒城群体相聚,最后与池州群体相聚。
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