目的明确咔唑类生物碱衍生物CZ-7对中枢神经系统髓鞘损伤的神经保护作用,探究CZ-7对髓鞘损伤中清除髓鞘碎片及促进髓鞘再生作用的影响及相关机制,阐明CZ-7在中枢神经系统髓鞘损伤中的保护作用,为治疗髓鞘损伤的药物开发和基于黄皮的咔唑类生物碱衍生物的药物开发提供有力的理论依据。方法1.将6-8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为空白对照组(Control组)、模型组(CPZ组)、给药组(CPZ+CZ-7组)。每天CPZ灌胃(给药剂量为300mg/kg)进行髓鞘损伤造模,造模同时CZ-7灌胃给药(给药剂量为20mg/kg)。造模4周后,对小鼠进行爬杆、抓力和平衡木行为学检测,随后对动物进行取材。2.用LFB染色和MBP免疫组化染色检测髓鞘的脱失情况;用QPCR检测与髓鞘形成相关的基因(MBP、MOG、PLP1和MOBP)的mRNA表达水平。3.通过dMBP免疫荧光染色和油红O染色检测CZ-7对髓鞘损伤特异部位胼胝体脱落的髓鞘碎片的清除作用。4.通过Iba1免疫荧光染色检测各组小鼠胼胝体中小胶质细胞的形态和数量,通过QPCR以及Iba1和MBP免疫荧光共染验证小胶质细胞对髓鞘碎片的吞噬作用。5.通过对M1、M2型小胶质细胞生物标志物的免疫荧光染色和QPCR检测小鼠胼胝体部位的小胶质细胞极化表型。6.通过NG2、O4免疫荧光染色观察CZ-7对少突胶质前体细胞的招募作用。7.分离并培养原代少突胶质前体细胞(oligodendroglial precursor cells,OPCs)。通过免疫荧光染色、Western blot、QPCR检测给予CZ-7后OPCs的分化和成熟情况。结果行为学检测结果显示CZ-7对CPZ诱导的小鼠体重增长缓慢和行为运动障碍有显著改善。病理和生化检测表明CZ-7可以有效改善CPZ诱导的小鼠的髓鞘损伤,说明CZ-7对髓鞘损伤具有明显的保护作用。机制研究发现,CZ-7可以促进CPZ诱导的小鼠胼胝体部位脱落的髓鞘碎片的清除,此清除作用与M2型小胶质细胞的吞噬作用密切相关。此外,CZ-7还可以促进少突胶质前体细胞被募集到髓鞘损伤区域并分化为可形成髓鞘的成熟少突胶质细胞,进而促进髓鞘再生。结论CZ-7通过增强M2型小胶质细胞的吞噬作用促进CPZ诱导的小鼠胼胝体部位髓鞘碎片的清除,改善介导髓鞘损伤及修复的胶质细胞微环境。同时促进OPCs的招募和分化成熟,从而改善髓鞘损伤促进髓鞘再生。