无色孔雀石绿时间分辨荧光免疫分析方法的建立

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孔雀石绿(MG)是一种合成的N-甲基二氨基三苯甲烷类染料。因其对鱼类的水霉病、小瓜虫病、鳃霉病等有显著的预防和治疗效果,曾被广泛地应用于水产养殖中。但经国内外学者研究发现,孔雀石绿(MG)及其在鱼体内的主要其代谢产物——无色孔雀石绿(LMG)均具有可致癌的蓄积性残留,进而对食品安全构成威胁,对人体健康造成极大的伤害。近些年,许多国家纷纷出台法令禁止MG在水产养殖中的使用。欧盟规定MG和LMG在动物组织中检测到的最低限为2μg/kg。因此,急需建立一种高效快速、准确灵敏的检测方法以应对日益严格的水产品出口技术壁垒,同时提高我国水产品安全检测技术水平和工作效率。   时间分辨荧光免疫分析(Time-resolvedfluoroimmunoassay,TRFIA)是一种在荧光分析基础上发展而来的超微量检测技术,它灵敏度高、特异性强、重复性好,其安全快速、非放射性的特点十分适合检测大批量样品。   本文采用时间分辨免疫分析(TRFIA)技术,建立无色孔雀石绿(LMG)的高灵敏的TRFIA检测方法,并对其进行了方法学考核。结果表明,该法灵敏度为0.1μg/kg,测量范围0.1~25μg/kg,批内变异系数3.6%,批间变异系数10.8%。与孔雀石绿的交叉反应率为17.4%,与结晶紫、副品红的交叉反应率小于0.01%。鱼血、鱼肉样品的平均回收率分别为112.6%和92.1%。LMG-TRFIA分析方法稳定性好,快速灵敏,在水产品安全检测领域具有良好的应用前景。
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