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本论文利用高效毛细管电泳技术(HPCE)对乳制品中酪蛋白糖巨肽及乳铁蛋白的测定方法进行了研究,分别优化出适合的最佳分离体系,主要内容分为如下三个方面:
(1)建立了HPCE在碱性分离体系下分离测定乳制品中酪蛋白糖巨肽(CMP)的新方法。电泳条件:以37cm×50μm(有效长度30cm)未涂层石英毛细管为分离柱,0.4mol/L,硼酸+0.64mol/L,三羟甲基氨基甲烷(Tris)(pH8.8)为分离缓冲溶液,50mmol/L醋酸溶液为样品介质,检测波长为214nm。在碱性分离条件下详细研究了影响CMP与杂质峰分离的因素,如分离缓冲溶液的种类、浓度、pH值等。CMP校正峰面积与质量浓度在60～4000mg/L范围内具有良好线性关系,线性相关系数为0.9993,检出限(S/N=3)为20mg/L,定量限为60mg/L。
(2)建立了HPCE在酸性分离体系下分离测定乳制品中CMP的新方法。电泳条件:以27cm×50μm(有效长度20cm)未涂层石英毛细管为分离柱,80mmol/L磷酸+40mmol/L,三羟甲基氨基甲烷(Tris)(pH2.2)为分离缓冲溶液,50mmol/L醋酸溶液为样品介质,检测波长为214nm。在酸性分离条件下详细研究了影响CMP分离的因素,如分离缓冲溶液的种类、浓度、pH值等。CMP校正峰面积与质量浓度在30～1000mg/L范围内具有良好线性关系,线性相关系数为0.9999,检出限为10mg/L,定量限为30mg/L。
(3)建立了简单且准确测定婴幼儿配方奶粉中乳铁蛋白(Lf)的高效毛细管电泳-紫外检测(CE-UV)新方法。有效的样品前处理方法及分离缓冲溶液是实现婴幼儿配方奶粉中Lf准确定量的关键因素。婴幼儿配方奶粉样品仅需用50mmol/L醋酸溶液处理后即可进样分析,提高了样品的分析通量及效率。以27cm×50μm(有效长度20cm)未涂层石英毛细管为分离柱,40mmol/L磷酸二氢钠+40mmol/L磷酸+5mmol/L聚氧乙烯月桂醚(Brij35)为分离缓冲溶液,分离缓冲液中加入Brij35不仅能够抑制Lf在石英毛细管壁的吸附,而且能够有效改善Lf与相邻蛋白峰的分离。Lf的校正峰面积与质量浓度在10～400mg/L范围内具有良好线性关系,线性相关系数为0.9999。检出限为3mg/L,定量限为10mg/L。该方法适用于检测婴幼儿配方奶粉中的Lf并获得了满意结果。