本课题主要研究HBx蛋白对Huh7细胞表观遗传学的修饰关系。乙肝病毒HBV的感染与人类急性肝炎、肝硬化以及肝癌的发生有密切关系，而在HBV表达的四个蛋白(表面、核心、聚合酶和X蛋白)中，X蛋白是一个重要的多功能调节蛋白，它在HBV感染、复制、发病和肿瘤发生过程中起主要作用。 过去，人们研究HBx致癌作用主要集中在遗传学异常，而目前认为肿瘤的发生不完全由遗传学异常所致，表观遗传学的改变也是重要因素。表观遗传调控机制包括DNA甲基化状态、基因组印迹、染色体修饰、组蛋白修饰以及miRNA调控状态等方式。本课题主要探讨的是HBx蛋白与Huh7细胞一些基因调控区DNA甲基化状态的关系以及HBx调节DNA甲基转移酶(DNMTs)的分子机制。 本研究首先通过基因芯片技术，分析Huh7细胞在转染HBx前后的基因表达谱变化，并以筛选出的上调基因IGFBP3和下调基因MT1F作为研究模型进行深入研究，探讨其表达改变与HBx诱导的表观遗传学改变的关系。研究发现，Huh7细胞转染HBx后，上调基因IGFBP3启动子区呈现低甲基化，而下调基因MT1F启动子区呈现高甲基化，与其转录表达活性一致，说明HBx蛋白可能改变了两个基因启动区的甲基化状态，从而使IGFBP3转录表达升高，而MT1F转录表达下降。 为探讨其内在分子机制，本研究又对DNA甲基化状态直接相关的DNA甲基转移酶与HBx的关系进行分析。DNA甲基转移酶主要包括DNMT1、DNMT3A和DNMT3B。通过荧光定量PCR和Western Blotting技术检测，未发现Huh7细胞在转染HBx后有明显DNMTs表达上升，但是用免疫共沉淀方法证明在Huh7细胞内HBx蛋白与DNMT1、DNMT3A相互作用，免疫荧光显微镜也观测到HBx蛋白与DNMT1、DNMT3A共定位于细胞核，提示在保持DNMTs总量不变的情况下，HBx蛋白与DNMTs蛋白作用改变了其在细胞内的分布，导致一些基因调控元件的高甲基化，使其转录表达沉默，而另一些基因调控元件的低甲基化，使其转录表达活化。