本研究利用基因工程手段将来源于嗜热菌Thermaerobacter subterraneus DSM13965的磷酸三酯酶编码基因克隆到大肠杆菌中，在毕赤酵母中进行高效表达及分离纯化，将该重组蛋白命名为TSsP，TSsP在真核表达系统中以胞外表达的方式进行表达，通过组氨酸标签镍柱分离纯化、非变性蛋白电泳和Western-blotting鉴定表达产物，并对该酶的基础酶学性质进行了初步探讨，旨在得到可以抵抗生产环境中苛刻条件的嗜热磷酸三酯酶，并为该酶达到食品级别奠定理论基础。研究的主要结论如下：1、本研究成功的将来源于嗜热菌Thermaerobacter subterraneus DSM13965的磷酸三酯酶编码基因克隆到大肠杆菌中，在毕赤酵母中进行高效表达及分离纯化，重组蛋白在真核表达系统中以胞外表达的方式进行表达，酵母诱导表达时间一般为96h，本研究中，在28℃，pH为6的条件下，重组酵母在液体培养基BMMY中进行诱导表达，当表达时间为72h时目标蛋白表达量到达最高，表达蛋白量为200mg/mL。通过镍柱亲和层析对目标蛋白进行纯化，制备出高纯度的蛋白。2、对TSsP的酶学性质进行了表征，研究表明，磷酸三酯酶水解底物具有“非专一性”，具有较强水解有机磷的能力及相对较弱的水解内酯的能力；该酶最适温度为75℃，75℃条件下半衰期为8h，最适pH为7，在碱性条件下稳定性高于酸性条件下的稳定性。这为该酶达到食品级别及工业化生产提供了重要参考。3、同时，针对较弱内酯水解能力，如何通过分子生物技术提高该酶对内酯的酶活力有待于进一步研究。研究中还注意到，磷酸三酯酶基因整合具有不稳定性，传代后容易发生基因丢失，因此在选择表达菌株时不能一味地追求高拷贝，外源基因整合数越多，给宿主带来的毒性也越大，菌株的稳定性减弱。