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本课题以初生、20日龄、40日龄和60日龄的金华猪和长白猪为研究对象,通过相关试剂盒测定及荧光定量PCR方法,比较了两个品种猪在四个日龄阶段体内防御素基因的表达量、免疫功能以及抗氧化能力,探讨了它们随日龄的变化规律以及存在的品种差异。主要研究结果如下:
1.选取初生、20日龄、40日龄和60日龄的金华猪和长白猪各三头,屠宰取各肠段样品,荧光定量PCR法检测各日龄阶段两个品种猪各肠段三种防御素的表达水平。结果表明,①随日龄变化趋势:从初生到60日龄,pBD-1和pBD-3基因在两个品种猪各肠段的表达量总体呈现随日龄的变化而上升的趋势,而pBD-2基因在两个品种猪结肠和回肠中的表达量随日龄的变化呈先下降后上升的趋势。②品种间差异比较:在20日龄、40日龄和60日龄时,金华猪各肠段中三种β-防御素基因的表达量均高于长白猪。在初生和20日龄时,金华猪pBD-1基因在十二指肠的表达量极显著高于长白猪(P<0.01);在60日龄时,金华猪pBD-1基因在空肠、回肠和结肠中的表达量显著高于长白猪(P<0.05),金华猪pBD-2基因在十二指肠、回肠和结肠的表达量均显著高于长白猪(P<0.05),金华猪pBD-3基因在十二指肠、空肠和回肠的表达量显著高于长白猪(P<0.05),结肠中的表达量极显著的高于长白猪(P<0.01),提示金华猪肠道防御素基因表达水平高于长白猪。
2.选取初生、20日龄、40日龄和60日龄的金华猪和长白猪各三头,屠宰取血清及各肠段样品,试剂盒法和荧光定量PCR法测定各日龄阶段两个品种猪血清及肠道相关免疫指标。结果表明,①随日龄变化趋势:从初生到60日龄,金华猪和长白猪血清中免疫球蛋白和肠道分泌型免疫球蛋白A(sIgA)的含量随日龄的变化呈现先下降后上升的趋势,这与仔猪阶段从母乳中获得免疫球蛋白及断奶应激有关;两个品种猪肠道中细胞因子基因的表达量随日龄的变化整体呈现上升趋势;血清中补体C3、C4随猪日龄的变化呈现先下降后上升的趋势,与28日龄的断奶应激有关;血清中溶菌酶活力随猪日龄的变化呈现上升的趋势。可见,随猪的生长,免疫系统逐渐完善,免疫功能逐渐加强。
②品种间差异比较:金华猪的血清免疫球蛋白的含量在初生、20日龄、40日龄和60日龄四个日龄阶段均高于长白猪,且在初生时,金华猪血清中IgA和IgM的含量均显著高于长白猪(P<0.05),而IgG在60日龄金华猪血清中的含量极显著高于长白猪(P<0.01);金华猪血清溶菌酶的活力在四个日龄阶段均极显著的高于长白猪(P<0.01);细胞因子IL-6在初生金华猪的十二指肠和60日龄金华猪的结肠的表达量均极显著的高于长白猪(P<0.01),IL-8在60日龄金华猪四个肠段的表达量显著高于长白猪(P<0.05),TNF-α基因在60日龄金华猪的十二指肠和结肠的极显著的高于长白猪(P<0.01),在40日龄和60日龄金华猪的回肠中TNF-α基因的表达量显著高于长白猪(P<0.05)。综上,在初生、20日龄、40日龄和60日龄四个日龄阶段,金华猪体内免疫球蛋白含量、补体水平、溶菌酶活力、sIgA含量及肠道细胞因子基因表达量均高于长白猪,提示金华猪的免疫功能要高于长白猪。
3.选取初生、20日龄、40日龄和60日龄的金华猪和长白猪各三头,屠宰取血清样品,试剂盒法测定各日龄阶段两个品种猪血清中五种抗氧化指标。结果表明:①随日龄变化趋势:从初生到60日龄,金华猪和长白猪血清中GSH-Px和CAT的活性随日龄的变化呈现上升的趋势,MDA的含量随日龄的变化呈现下降的趋势,而T-SOD的活性和T-AOC随日龄的变化呈现先下降后上升的趋势,可能受28日龄的断奶应激影响较大。整体趋势是金华猪和长白猪抗氧化能力随日龄的变化,抗氧化能力提高。②品种间差异比较:金华猪血清中五个抗氧化指标初生、20日龄、40日龄和60日龄四个日龄阶段均高于长白猪,表明金华猪的抗氧化能力高于长白猪。其中,金华猪血清中GSH-Px的含量在60日龄显著的高于长白猪(P<0.05),在20日龄和40日龄极显著的高于长白(P<0.01),金华猪的总抗氧化能力T-AOC在初生和40日龄也极显著的高于长白猪(P<0.01),提示金华猪的抗氧化能力高于长白猪。
4.通过对不同日龄金华猪和长白猪体内防御素基因表达量、免疫功能以及抗氧化能力的研究揭示:随猪日龄的变化,两个品种猪肠道防御素表达水平、免疫功能以及抗氧化能力呈现上升的趋势,整体趋势相一致;不同品种间比较,地方优良品种金华猪防御素基因表达水平、免疫功能以及抗氧化能力均高于国外引进品种长白猪,提示防御素的表达可能与机体的免疫和抗氧化能力有关,同时揭示抗菌肽的表达可能与猪的抗病力有关。