阻遏矽肺早期纤维化的实验研究

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目的:比较骨髓间充质样干细胞(bone marrow-derived mesenchymal-like stem cells, BM-MSCs)与pcDNA3.1-HGF转染的BM-MSCs对SiO2所致的大鼠肺泡炎和早期肺纤维化的治疗作用并探讨其机制。方法:1、收集,培养雄性Wistar幼鼠(体重15~20 g)的原代BM-MSCs,并进行DAPI标记。2、将50只雄性Wistar大鼠随机分为以下三组,模型组(10只):气管滴注40 mg/mlSiO2混悬液1 ml,次日,尾静脉注入PBS 1 ml; BM-MSCs组(20只):气管滴注40 mg/mlSiO2混悬液1 ml,次日,尾静脉注入106/ml BM-MSCs 1 ml; pcDNA3.1-HGF+BM-MSCs组(20只):气管滴注40 mg/ml SiO2混悬液1 ml,次日,尾静脉注入106/ml pcDNA3.1-HGF转染的BM-MSCs 1 ml。3、造模后的14天和28天,分别处死大鼠,每次模型组5只,BM-MSCs组与pcDNA3.1-HGF+BM-MSCs组各10只,取肺组织,冰冻切片后,荧光显微镜下检测体内DAPI标记细胞;常规切片后,HE和Masson染色观察炎症和纤维化情况;Western blot检测体外pcDNA3.1-HGF转染后BM-MSCs及应用pcDNA3.1-HGF转染后BM-MSCs的大鼠肺组织的HGF表达量;ELISA法检测肺组织中TNF-α的含量,样本碱水解法检测肺组织羟脯氨酸(HYP)的含量。结果:1、SiO2造模后,取肺组织行HE,Masson染色,光学显微镜下观察其病理组织形态上符合纤维化改变。荧光显微镜下,DAPI标记的细胞在BM-MSCs组和pcDNA3.1-HGF+BM-MSCs组大鼠的肺组织中均被观察到。2、HE、Masson染色及HYP结果显示在处理后的14、28天,与模型组相比,BM-MSCs组,pcDNA3.1-HGF+BM-MSCs组大鼠的肺炎和肺纤维化程度明显减轻(P<0.05),且pcDNA3.1-HGF+BM-MSCs组较BM-MSCs组的抗炎抗纤维化作用更好(P<0.05),差异具有统计学意义。3、模型组的肺组织TNF-α含量在28天时低于14天时(P<0.05),在14,28天时,pcDNA3.1-HGF+BM-MSCs组和BM-MSCs组的肺组织TNF-α含量均低于模型组(P<0.05), pcDNA3.1-HGF+BM-MSCs组最低(P<0.05),差异有统计学意义。结论:应用pcDNA3.1-HGF转染后的BM-MSCs比单独应用BM-MSCs能更有效的对抗SiO2诱导的大鼠肺泡炎和早期肺纤维化,作用机制可能与其减轻肺组织的炎症有关。
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