水稻细菌性条斑病菌与致病相关的双组份感受子基因的鉴定

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水稻细菌性条斑病由水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae pathovar oryzicola,简称Xoc)所引起的,是造成水稻严重减产的重要细菌病害之一,限制了亚洲许多及非洲部分主要粮食作物区的生产。多数植物病原菌主要利用III分泌效应物胞外酶、胞外多糖、脂多糖等致病因子来作用。细菌主要利用双组份调控系统感受外界环境的刺激并做出反应,其在致病性以及作为抗生素抗性等方面的作用正在成为人们关注的热点。由于感受子的结构特点使其更容易感应环境刺激并将信号转导到对应的调控子从而调控下游基因的转录,所以它在双组份系统中起着重要作用。基因组注释表明Xoc GX01双组份调控系统中共有47个感受子基因和52个调控子基因。本研究通过pK18mob同源单交换的方法对Xoc GXO1中的25个感受子基因进行了整合突变,得到了 22个整合突变体。对这些突变体进行胞外蛋白酶、胞外多糖和游动性的检测表明:XOC1172、XOC1020、XOC0606、XOC3259、XOC1980、XOC4053、XOC0294、XOC0707、XOC0269这9个基因的突变体与Xoc GX01相比胞外蛋白酶明显下降;XOC1172、XOC4052、XOC0606、XOC3259、XOC1980、XOC1178、XOC0294、XOC0269 这8个基因的突变与XocGXO1相比胞外多糖明显下降;XOC1172、XOC1178、XOC0606、XOC0707、XOC0294、XOC3897、XOC1980、XOC4018、XOC0665、XOC2440这10个基因的突变与XocGX01相比游动性明显下降,并对这些突变体进行致病力检测,但是只有其中16个突变体数据可行,数据表明致病力下降很明显的基因有13个。通过筛选发现:XOC06、XOC0294、XOC1980、XOC1172和XOC1020的突变体在胞外蛋白酶、胞外糖、游动性、致病力上与XocGXO1相比显著下降。为了证实这几个基因是致病相关基因,对它们进行反式功能互补,XOC1172、XOC0606、XOC0294致病力恢复到野生型水平,但其他表型却没有恢复,XOC1980、XOC1020的互补菌株致病力和表型均能恢复到野生型水平,对XOC1980、XOC1020的进一步研究表明:XOC1980基因的突变致使细菌胞外多糖、胞外蛋白酶、游动性、致病力显著下降,但并不影响HR反应、细胞繁殖生长以及生物膜的生成;XOC1020基因的突变致使细菌胞外蛋白酶、致病力显著下降,不影响游动性、胞外多糖产量、HR反应、细胞繁殖生长以及生物膜的生成。
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