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蜕皮激素是昆虫体内最为重要的两类激素之一,它控制着昆虫的生长、发育、繁殖和衰亡。目前,很多研究表明蜕皮激素在昆虫的先天性免疫方面也起着作用,但是蜕皮激素是如何调节昆虫免疫的还并不是十分清楚。不同的研究针对于不同物种得出的结论有所不同,即使对于家蚕的研究,蜕皮激素对免疫系统的影响也不是确定的。另外,前人研究蜕皮激素和昆虫免疫的关系时,均通过体外实验,或者注射外源蜕皮激素来观察对免疫的影响。在受到感染后,昆虫是否会主动调节体内蜕皮激素的滴度,从而影响自身免疫?这项研究还是未知的。本研究以家蚕作为模式探索了蜕皮激素在家蚕免疫体系中的作用,发现家蚕受到外源微生物感染后,体内编码蜕皮激素合成相关酶——3脱氢蜕皮激素3β还原酶(3-dehydroecdysteroid 3β-reductase,3DE-3β-redutase)的基因的表达显著上调,暗示其可能在家蚕免疫中起作用。另外我们通过基因干涉的方法证实了该基因对于免疫的影响。所取得研究结果如下:
(1)当家蚕受到外源微生物感染时,注射一定浓度的20E可以显著提高家蚕的存活率。进一步地,注射FITC标记的细菌实验时,通过显微镜观察到,注射过20E的家蚕的血液样本中细菌数量显著低于没注射过20E的家蚕。以上结果说明,20E能够增强家蚕对外源微生物的清除能力;
(2)在昆虫细胞免疫中,血细胞会在外源物入侵时发生迁移,各类型血细胞发挥作用,如吞噬作用、包囊作用和节结的形成等。因此血细胞迁移的程度反映了细胞免疫的强弱。用不同浓度的20E处理家蚕血液,其血细胞迁移率有明显变化。该结果暗示20E可能通过增强血细胞的迁移,来达到清除外源微生物的作用;
(3)受外源微生物感染后,家蚕蜕皮激素合成基因3DE-3β-reductase基因的表达受到显著上调,说明家蚕有可能通过提高3DE-3β-reductase基因表达来增加体内蜕皮激素的滴度。
(4)在成功干涉家蚕3DE-3β-reductase基因后,注射外源微生物,家蚕的存活率显著低于对照组(未干涉3DE-3β-reductase基因的家蚕),并且在干涉掉家蚕3DE-3β-reductase基因后,大部分家蚕的抗菌肽基因呈下调表达。表明3DE-3β-reductase基因确实能够参与家蚕的免疫体系。
综上所述,我们的结果表明蜕皮激素能够增强家蚕的细胞免疫水平,进而加快家蚕清除体内外源微生物的数量。另外,当家蚕受到外源微生物感染后,家蚕可以增加蜕皮激素合成相关基因3DE-3β-reductase基因的表达,以主动增加体内蜕皮激素的滴度,从而提高家蚕自身的免疫水平。