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目的:肝脏缺血再灌注损伤(IRI)是肝移植与肝外科工作中常见的组织器官损伤。肝脏IRI对肝病的发展、肝脏手术效果和患者生存预后至关重要。如何保护缺血的肝细胞,减少肝脏IRI的发生,都是研究的热点。本研究旨在研究小鼠肝脏IRI伤过程中,mi R-30b表达与细胞自噬活性的变化,探讨mi R-30b调节Atg12对IR处理诱导肝脏细胞自噬与损伤的影响,以揭示肝脏缺血再灌注损伤过程中的潜在机制,为肝脏IRI的预防和治疗提供新思路。方法:建立小鼠70%肝脏缺血再灌注模型,检测小鼠血清ALT、AST含量变化,HE染色与TUNEL法观察肝脏组织病理学改变与细胞凋亡情况;q RT-PCR检测各组肝组织mi R-30b-5p、Atg12 m RNA、Atg5 m RNA的表达变化,透射电镜观察肝细胞自噬体变化与Western blot检测各组肝组织Atg12、Atg12-Atg5、LC3与Cleave Caspase-3表达变化。小鼠尾静脉注射mi R-30b-5p agomir或mi R-30b-5p antagomir,进一步验证mi R-30b在肝脏发生缺血再灌损伤过程中的作用。使用自噬激活剂雷帕霉素与自噬抑制剂3-MA预处理肝细胞系AML12细胞,再建立缺氧/复氧(H/R)细胞模型以模拟肝脏IRI,以明确自噬对H/R处理诱导AML12细胞存活能力的影响。应用生物信息学技术(mi RBase、Target Scan)、q RT-PCR、Western blot以及Luciferase荧光霉素报告等实验方法验证Atg12为mi R-30b靶基因。通过mi R-30b-5p mimics、mi R-30b-5p inhibitor或Atg12 si RNA转染AML12细胞,共聚焦显微镜与透射电镜观察AML12细胞内自噬体变化,Western blot检测各组肝组织自噬蛋白Atg12、Atg12-Atg5、LC3表达变化,以探讨mi R-30b调节Atg12对H/R处理诱导AML12细胞自噬的影响。结果:IR处理组小鼠血清ALT、AST含量较Sham组明显上升(P<0.05),且在肝组织中可观察到肝细胞发生水肿、气球样变,肝窦区变窄、中央静脉充血和点灶状坏死等病理变化。缺血再灌注组小鼠肝组织mi R-30b-5p表达水平比Sham降低(P<0.001),并随着肝脏恢复血流后时间增加而减少,而Atg12m RNA、Atg5 m RNA表达水平在各个再灌注时间点均比Sham组增高(P<0.001),并随着再灌注时间增加而增加;Sham组肝组织内TUNEL标记的凋亡细胞较少,而IR处理组凋亡细胞随着再灌注时间的增长而显著增多。透射电镜下Sham组肝细胞内自噬体较少,而IR处理组的自噬体的数量亦显著增多。缺血再灌注组小鼠肝组织自噬标记物Atg12、Atg12-Atg5、LC3Ⅱ蛋白表达水平随着缺血再灌注时间点增加而升高(P<0.05),同时,Cleave Caspase-3蛋白水平随着缺血再灌注时间点增加而升高。尾静脉注射mi R-30b-5p agomir后小鼠血清ALT、AST水平均降低,而mi R-30b-5p antagomir组小鼠血清ALT、AST水平均升高,各组之间的差异有统计学意义(P<0.001)。mi R-30b-5p agomir组肝组织病理学改变较mi R-NC组减轻,TUNEL标记的凋亡细胞数量减少;而mi R-30b-5p antagomir组肝组织病理学改变加重,TUNEL标记的凋亡细胞数量增加。与mi R-NC组比较,mi R-30b-5p agomir组小鼠肝组织中PCNA表达增加,Caspase-3、Cleave Caspase-3、PARP-1蛋白水平降低;而mi R-30b-5p antagomir组小鼠肝组织中PCNA表达减少,Caspase-3、Cleave Caspase-3与PARP-1水平较mi R-NC组升高。Luciferase荧光霉素报告等实验方法验证mi R-30b通过结合Atg12基因的3’-UTR区抑制Atg12的表达,Atg12是mi R-30b的直接靶基因。共聚焦显微镜与透射电镜结果说明mi R-30b可以减少肝细胞自噬体形成,抑制细胞自噬活性。MTT结果显示,经自噬激活剂雷帕霉素预处理后,缺氧/复氧使Rap组AML12细胞的存活率较IR组显著降低(P<0.001);而预先采用3-MA抑制肝细胞的基础自噬水平,缺氧/复氧使3-MA组AML12细胞的存活率较缺氧/复氧组显著上升(P<0.01);AML12细胞在H/R处理过程中,mi R-30b可增加肝细胞的存活率,同时Atg12 si RNA均可以提高mi R-30b-5p mimics或mi R-30b-5p inhibitor预处理肝细胞的存活率;Atg12 si RNA均可以降低mi R-30b-5p mimics或mi R-30b-5p inhibitor转染AML12细胞后的Atg12、Atg12-Atg5与LC3蛋白表达水平。结论:缺血再灌注诱导小鼠肝脏组织mi R-30b表达下调,而自噬相关蛋白Atg12的表达上调和自噬活性增高。mi R-30b可减轻小鼠肝脏IRI,同时抑制肝细胞凋亡和促进肝细胞的损伤修复。肝细胞IRI过程中,mi R-30b通过靶向调控Atg12以抑制自噬体形成,进而减弱肝细胞自噬活性。