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背景:Ca2+是一种普遍存在的第二信使,控制着众多的细胞功能,从短期的细胞收缩和分泌反应到长期的转录、生长和细胞分裂调节。钙池操纵的Ca2+内流(Store-Operated Calcium Entry,SOCE)参与许多重要的Ca2+信号生理过程。目前研究的最清楚、最典型的SOC电流是钙释放激活的钙(Ca2+release-activatedCa2+,CRAC)电流。CRAC已被证明存在于多种细胞中,如肥大细胞、免疫细胞、内皮细胞等,并且STIM1和Orai1介导的CRAC对于免疫细胞和内皮细胞的增殖发挥着重要作用。在血管增生性疾病的发病过程中,许多血管平滑肌细胞(VSMCs)会由收缩表型转变为合成表型,并伴随着细胞的大量增殖、向血管内层的迁移和过量的细胞外基质的产生。
目的:证明CRAC通道参与VSMCs的增殖过程,2-APB能够有效抑制其增殖,为血管增生性疾病的治疗提供有前景的新药。
方法:免疫组织化学方法检测CRAC的组成成分STIM1和Orai1在大鼠血管组织水平上的表达；分离大鼠原代VSMCs,并进行平滑肌α-actin(SMα-actin)的免疫荧光鉴定；应用Western blotting和免疫荧光两种方法检测STHM1和Orai1在VSMCs中的存在；通过形态观察和SMα-actin的Western blotting检测来证实大鼠VSMCs在培养过程中的表型转换；Western blotting方法检测表型转换中STIM1和Orai1表达量的变化；观察2-APB对VSMCs细胞形态的影响,Brdu免疫荧光检测2-APB对VSMCs增殖的抑制作用；Western blotting检测2-APB对VSMCs中STIM1和Orai1表达量的影响。
结果:大鼠血管上有CRAC组成蛋白STIM1和Orai1的表达；原代VSMCs中也存在STIM1和Orai1；随着体外培养时间的延长VSMCs会发生由收缩型向合成型的表型转换,在此过程中STIM1和Orai1的表达量升高；2-APB可抑制STIM1和Orai1的表达,同时也抑制了VSMCs的增殖,并可使其表型向收缩型回复。
结论:CRAC通道的抑制剂2-APB可以有效地抑制VSMCs的表型转换和增殖,同时可以使表型向收缩型逆转。意义在于:为血管增生性疾病提供一个新的药物靶点-CRAC,为血管增生性疾病的治疗提供一个很有前景的药物-2-APB或其类似物。