【摘 要】
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探讨体外培养并诱导骨髓间充人质干细胞(Mesenchymal StemCells,MSCs)分化为表皮细胞的可行性,从而为组织工程化皮肤的构建提供新的种子细胞来源。 方法 1.抽取健康青年志
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探讨体外培养并诱导骨髓间充人质干细胞(Mesenchymal StemCells,MSCs)分化为表皮细胞的可行性,从而为组织工程化皮肤的构建提供新的种子细胞来源。
方法
1.抽取健康青年志愿者右髂前上嵴骨髓,采用改良的全骨髓贴壁法培养人骨髓间充质干细胞并传代扩增,然后采用免疫细胞化学染色法检测细胞抗原CD<,44>和CD<,45>,并结合细胞形态学及其生长特性进行鉴定。
2.以HaCaT细胞培养上清液联合EGF体外诱导骨髓间充质干细胞,一周后倒置相差显微镜及透射电镜下观察细胞的形态学变化、细胞内超微结构的改变,并采用免疫细胞化学染色法检测K10、K19及β <,1>整合素的表达。
结果
1.免疫细胞化学染色法AEC染色细胞CD<,44>阳性而CD<,45>阴性,结合形态学及细胞生长特性证实我们分离、培养的细胞为MSC<,s>。
2.诱导一周后的MSCs,倒置相差显微镜镜下可见大量扁平的多角形细胞紧密连接成片,呈铺路石状排列生长;透射电镜发现细胞增殖、分化活跃,部分细胞胞浆内可见成团的角蛋白丝;免疫细胞化学染色显示多数细胞出现K19和β<,1>。整合素双染色阳性,个别细胞K10染色阳性而β<,1>。整合素染色阴性。
结论
1.改良的全骨髓贴壁法可培养出较纯的人骨髓间充质干细胞;
2.人骨髓间充质干细胞在永生化人表皮细胞培养上清液联合EGF的诱导条件下可分化为表皮细胞。
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